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农杆菌介导PRK基因转化水稻的技术与鉴定研究

一、引言

1.1研究背景与意义

光合作用是地球上最重要的化学反应之一，它为地球上几乎所有的生命活动提供了能量和物质基础。根据光合作用碳同化途径的不同，陆生植物主要分为C3、C4和CAM三种光合类型。C3植物在光合作用的暗反应中，CO?首先与五碳化合物（RuBP）结合，形成2分子三碳化合物（3-PGA），其光补偿点较高，光饱和点较低，在强光下光合效率相对较低，叶肉细胞中只有一种叶绿体，对CO?的亲和力较低，在高温、干旱条件下，容易发生光呼吸，消耗能量，降低光合效率。常见的C3作物包括水稻、小麦、大豆等。C4植物的光合作用具有独特的C4途径，CO?先在叶肉细胞中被磷酸烯醇式丙酮酸（PEP）固定，形成四碳化合物（如草酰乙酸），然后四碳化合物运输到维管束鞘细胞中释放出CO?，再进入卡尔文循环。C4植物光饱和点高，光补偿点低，在强光、高温下光合效率高，能更有效地利用CO?，且具有较低的光呼吸，对干旱、高温环境的适应能力较强，例如玉米、高粱、甘蔗等都属于C4植物。CAM植物则在夜间气孔开放，吸收CO?并固定成苹果酸储存在液泡中；白天气孔关闭，苹果酸分解释放出CO?，进入卡尔文循环进行光合作用，这种方式使CAM植物能在干旱环境下减少水分散失，同时利用夜间较低的温度和较高的湿度吸收CO?，提高光合效率，常见的CAM植物有仙人掌、火龙果、菠萝等。

在这三种光合类型中，C4植物相较于C3植物具有显著的光合优势。C4植物的叶片具有独特的花环型（Kranz）结构，维管束鞘细胞与叶肉细胞形成功能互补的协作系统，维管束鞘细胞含有发达的内膜系统，其叶绿体呈颗粒状排列，叶肉细胞的叶绿体呈现典型的片层结构。这种结构使得叶肉细胞通过磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEP羧化酶）固定大气CO?生成C4酸，四碳化合物通过胞间连丝运输到维管束鞘细胞后分解释放高浓度CO?，为卡尔文循环提供底物。一方面，维管束鞘细胞形成的密闭环境有效减少了光呼吸底物氧气的渗透，使Rubisco酶在CO?富集条件下优先进行羧化反应；另一方面，叶肉细胞与维管束鞘细胞的协同作用实现了CO?的主动运输机制，在气孔导度较低时仍能维持光合系统的高效运转。从生化机制上看，C4途径的PEP羧化酶对CO?的亲和力是Rubisco酶的5-10倍，生成的苹果酸或天冬氨酸在维管束鞘细胞中脱羧酶作用下释放高浓度CO?，可达大气浓度的20倍，使得Rubisco酶始终处于CO?饱和状态，将羧化反应的量子效率提升至理论最大值。虽然C4途径每固定1分子CO?需要额外消耗2个ATP，但在高温强光环境下，通过抑制光呼吸可得到充分补偿，在40℃环境下，C4植物的净光合速率可比C3植物高2-3倍。此外，C4植物在水分利用效率、低CO?环境竞争优势、盐碱胁迫耐受性等方面也表现出色，其蒸腾系数普遍在250-350之间，远低于C3植物的450-950，在大气CO?浓度低于500ppm时，C4途径的CO?泵机制开始显现竞争优势，在土壤电导率达20dS/m时，一些C4植物如碱蓬仍能正常生长。

水稻作为全球最重要的粮食作物之一，是典型的C3植物。随着全球人口的持续增长以及人们对粮食需求的不断增加，提高水稻产量成为农业领域的重要任务。光合作用效率是影响水稻产量的关键因素，由于C3植物自身光合特性的限制，在高温、强光、干旱等逆境条件下，水稻的光合效率会受到明显抑制，进而影响产量。因此，提高C3作物（如水稻）的光合效率具有至关重要的意义，它是增加水稻产量、保障粮食安全的关键策略之一。

磷酸核酮糖激酶（PRK）是光合作用C4循环的关键酶之一，它能够催化ATP和3-磷酸甘油醛（3-PGA）反应生成磷酸核酮糖（Ru5P），而Ru5P是Rubisco催化CO?固定的底物RuBP的前体物质。在C4植物中，PRK参与了C4循环中CO?的高效固定和同化过程，对维持C4植物的高光合效率起着不可或缺的作用。将C4植物中参与高效光合途径的关键基因导入C3植物，是提高C3植物光合效率的重要策略之一。本研究运用农杆菌介导的方法将C3植物拟南芥的PRK基因转入C3植物水稻，旨在增加水稻中PRK的表达量，期望其在水稻中发挥类似C4植物中PRK的作用，从而初步探究转PRK基因水稻光合生理的变化，为通过基因工程手段提高水稻光合效率提供技术途径和理论基础，这对于培育高光效水稻品种、提高水稻产量具有重要的实践意义，也有助于深入理解光合作用的分子