第三章生物材料的预处理、细胞破碎和液固分离.pptVIP

第三章生物材料的预处理、细胞破碎和液-固分离;第一节生物材料的预处理

第二节细胞破碎

第三节液-固分离;生物活性物质的存在特点;一、预处理的目的和要求

生物材料中的生化组成数量大、种类多，目的物与杂质的理化性质十分接近，分离纯化较困难

目的——改变料液的流变特性，以及除去对后面纯化有影响的杂质

要求——防止目的物的失活

;根据生物活性物质存在方式与特点

—胞外：

由细胞产生再释放出来的

无活性的酶原需活化：先活化再提取

先提取再活化;2.后续操作的要求

一般要求：澄清、pH、一定的浓度

不同后续操作有不同的要求

离子交换---高价无机离子、澄清度等严格控制

溶剂萃取---蛋白质含量较低，防乳化

;3.目的物稳定性

不稳定的：要防失活

青霉素---pH4.8-5.2，低温

蛋白类---高级结构

稳定的：可采用较剧烈的变性和处理条件，沉淀杂质蛋白

;三、动物材料的预处理;四、细胞培养液的预处理;（1）加入凝聚剂

凝聚作用：

指在某些电解质作用下，使胶体粒子的扩散双电层的排斥电位降低，破坏了胶体系统的分散状态，而使胶体粒子聚集的过程。;胶体粒子稳定的原因：

带同种电荷静电排斥作用

表面水化作用，形成水化层

无机盐促凝聚作用：

加入相反电性电解质，中和胶体表面电荷，降低了双电层的排斥力

无机盐在水中的水化作用，破坏了胶粒水化层;影响凝聚作用的主要因素有无机盐的种类、化合价以及无机盐的用量等。

通常培养液中细胞或菌体带负电荷，常采用高价阳离子促其凝固。

阳离子对带负电荷的胶粒凝聚能力的次序为：Al3+Fe3+H+Ca2+Mg2+K+Na+Li+

常用的凝聚剂有：Al2(SO4)3·18H2O、AlCl3·6H2O、FeCl3、ZnSO4、MgCO3等。

;（2）加入絮凝剂

絮凝剂：有机高分子，易溶，链长，活性功能基团多

絮凝作用：

当往胶体悬浮液中加入絮凝剂时，胶粒可强烈吸附在絮凝剂表面的功能团上，而且一个高分子聚合物的许多链节分别吸附在不同的颗粒的表面上，形成架桥联接，形成粗大的絮凝团沉淀出来，有助于过滤。;影响因素：

??子量：大，效果好；过大，溶解度↓

用量：低浓度增加用量有助架桥，浓度过高吸附饱和失去架桥作用，降低了效果。

pH：影响功能团电离度，电离度↑，链伸展，效果↑

操作条件：

搅拌：初期，快好；后期，会破坏絮凝团

;（3）变性作用

天然蛋白质分子受到某些物理因素（如热、紫外线照射、高压和表面张力等）、化学因素（如有机溶剂、脲、胍、酸、碱等）影响时，生物活性丧失，溶解度降低，不对称性增高以及其他的物理化学常数发生改变。

用途：

杂蛋白质变性沉淀析出

方法：

加热、大幅度改变pH，加有机溶剂、重金属盐或表面活性剂;（4）吸附

方法：

—加入吸附剂：活性碳除热原

—加入反应剂：相互作用形成沉淀吸附蛋白质

四环素发酵液：黄血盐+硫酸锌亚铁氰化锌钾K2Zn3[Fe(CN)6]2的胶状沉淀，能将杂蛋白质和菌体等黏附在其中而除去。

枯草杆菌的碱性蛋白酶发酵液：

氯化钙+磷酸盐磷酸钙盐沉淀（吸附、助滤）;（5）等电沉淀

—常与其他方法合用

（6）加各种沉淀剂沉淀

—沉淀剂与蛋白质形成复合物沉淀;2.多糖的去除

酶：转化为单糖

如发酵液中残留的淀粉：淀粉酶

粘多糖与一些阳离子表面活性剂如十六烷基溴化铵（CTAB）形成沉淀

;Ca2+——草酸、草酸钠→形成草酸钙沉淀（注意回收草酸）

Mg2+——三聚磷酸钠(Na5P3P10)→形成三聚磷酸钠镁可溶性络合物

Fe2+——黄血盐(K4Fe(CN)6)→普鲁士蓝沉淀;微生物细胞和植物细胞外层均为细胞壁，细胞壁里面是细胞膜

动物细胞没有细胞壁，仅有细胞膜。

通常细胞壁较坚韧，细胞膜脆弱，易受渗透压冲击而破碎，因此细胞破碎的阻力主要来自于细胞壁。;一、机械法

1、匀浆法

2、珠磨法

3、超声波;一、机械法

1高压匀浆法

定义—利用高压细胞悬浮液因减压所产生的剪切力而达到细胞破碎的过程

工作原理：液－液剪切力、压力差等

特点：

适用对象广

工业化、实验室中应用

细胞完全破碎

;

1.高压匀浆器

原理：进入高压室的细胞悬浮液被强迫通过一个狭窄的小孔，产生液相剪切力引起细胞破碎。;易造成堵塞的团状或丝状真菌，

较小的革兰氏阳性菌，

含有包含体的基因工程菌（因包含体坚硬，易损伤匀浆阀）;2高速珠磨法

定义—利用由高速转动的珠子所产生的剪切力而达到细胞破碎的过程

工作原理：固