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HEK-293系列细胞株特点对比分析

引言

HEK-293细胞株作为生物医学研究及生物技术产业中应用最为广泛的工具细胞之一，自其建立以来，经过数十年的发展和改造，已衍生出众多特性各异的亚系。这些衍生株在保留原始HEK-293细胞某些基本特征的同时，通过基因工程手段或适应性培养，获得了诸如更高的转染效率、特定的糖基化修饰能力、悬浮生长适应性以及更高的重组蛋白表达水平等独特优势。本文旨在对HEK-293系列中几种最为常用的细胞株的特点进行系统性对比分析，以期为科研人员根据具体实验需求选择适宜的细胞模型提供参考。

HEK-293系列主要细胞株特点剖析

原始HEK-293细胞

HEK-293细胞，全称为HumanEmbryonicKidney293细胞，起源于1970年代，由AlexvanderEb实验室通过腺病毒5型（Ad5）DNA转染原代人胚胎肾细胞而建立。其基因组中整合了Ad5的E1A和E1B基因，这赋予了细胞在体外的无限增殖能力。

主要特点：

*贴壁生长特性：传统的HEK-293细胞在培养时需要贴附于经明胶或其他基质包被的培养器皿表面。

*转染效率：相较于早期的一些传代细胞系，HEK-293细胞具有相对较高的转染效率，这使其成为瞬时表达重组蛋白的常用选择。

*病毒包装能力：由于其腺病毒E1区的缺失互补特性，HEK-293细胞是生产复制缺陷型腺病毒的理想宿主，也常用于其他病毒如慢病毒、逆转录病毒的包装。

*应用广泛：在基础研究中，常用于基因功能研究、信号通路分析、重组蛋白表达等。

然而，原始HEK-293细胞在大规模悬浮培养、特定翻译后修饰（如复杂糖基化）的精确调控以及某些重组蛋白的高产率表达方面存在一定局限性，这也催生了后续一系列衍生株的开发。

HEK-293T/293FT细胞

HEK-293T细胞是在HEK-293细胞基础上，通过转入SV40大T抗原（SimianVirus40LargeTAntigen）基因而构建的衍生株。293FT细胞则是进一步优化，常用于高效病毒包装的HEK-293T亚系。

主要特点：

*高转染效率与复制起始点：SV40大T抗原能够与含有SV40复制起始点（ori）的质粒结合，从而驱动质粒在细胞内的高效复制，显著提高了瞬时转染的表达水平，尤其适用于需要大量重组蛋白的实验。

*病毒包装优化：因其高转染效率和质粒复制能力，293T/293FT细胞是生产慢病毒、逆转录病毒等病毒颗粒的首选细胞系之一，能产生较高滴度的病毒。

*生长特性：仍保留一定的贴壁依赖性，但部分亚系经驯化后可在一定程度上适应悬浮培养。

*应用重点：病毒包装、瞬时高表达重组蛋白、蛋白质相互作用研究（如双杂交系统）等。

HEK-293E/293EBNA1细胞

HEK-293E细胞（亦常标注为293-EBNA或293EBNA1）是通过稳定表达EB病毒核抗原1（EBNA1）而获得的衍生株。

主要特点：

*episomal复制能力：EBNA1蛋白能与质粒上的EBV复制起始点（oriP）相互作用，使质粒以附加体（episome）形式在细胞内稳定存在并复制，无需整合到宿主基因组即可实现长期、稳定的表达，尤其适用于那些整合可能导致基因沉默或毒性的外源基因。

*稳定表达与筛选：便于建立稳定表达细胞系，且在筛选过程中，携带oriP/EBNA1系统的质粒丢失率较低。

*蛋白表达水平：相较于原始HEK-293，其稳定表达的蛋白水平通常更高。

*培养特性：部分293E亚系已被驯化适应无血清悬浮培养，适合大规模蛋白生产。

HEK-293S/293SG细胞

HEK-293S及其衍生的HEK-293SG细胞是为了特定糖基化研究和重组蛋白（尤其是膜蛋白和分泌蛋白）的结晶学研究而开发的。它们通常缺乏某些糖基转移酶活性。

主要特点：

*简化的糖基化修饰：HEK-293S细胞通常缺乏N-乙酰葡萄糖胺转移酶I（GnTI）活性，导致其表达的糖蛋白主要为高甘露糖型N-糖链，这种简化的糖基化结构有助于重组蛋白（尤其是膜蛋白）的结晶和结构解析。

*悬浮生长能力：HEK-293S细胞通常适应悬浮培养，便于大规模生产。

*应用局限与特定：由于其糖基化模式与人源复杂糖基化有差异，可能影响某些蛋白的活性、稳定性或免疫原性，因此更适用于结构生物学研究，而非作为治疗性蛋白生产的首选细胞系，除非对糖基化有特殊要求。

HEK-293F/293H细胞

HEK-293F和HEK-293H细胞是专为大规模悬浮培养和高蛋白产量而优化的HEK-293衍生株。

主要特点：

*悬浮生长适应性：这些细胞株在无血清、化学成分明确的培养基中能高效悬浮生长，细胞密度和活力都较高，非常适合生物反应器中的大规模工