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基于构象转换和聚合酶反应的核酸适配体传感分析新方法与应用探索

一、引言

1.1研究背景与意义

在生命科学与分析检测领域，对生物分子的高灵敏、高特异性检测始终是研究的核心与热点。随着科技的不断进步，传统的检测方法如酶联免疫吸附测定（ELISA）、聚合酶链式反应（PCR）等，虽在一定程度上满足了部分检测需求，但也逐渐暴露出诸多局限性。例如，ELISA中抗体的制备不仅繁琐，成本高昂，而且稳定性欠佳；PCR技术对实验条件要求苛刻，操作复杂，耗时较长。这些不足促使科研人员不断探索和开发新型的检测技术。

核酸适配体（Aptamer）作为一种新型的分子识别元件，自1990年被发现以来，因其独特的优势受到了广泛关注。核酸适配体是通过指数富集的配体系统进化技术（SELEX）从随机单链寡核苷酸文库中筛选得到的一段能与靶分子特异性结合的单链DNA或RNA序列。它可以通过分子内碱基配对、静电作用、氢键、范德华力等作用折叠形成多种空间结构，能识别并结合重金属离子、抗生素、小分子、蛋白质、细胞等各种靶分子，具有与抗原-抗体反应相类似的高度亲和性和特异性，被人们称为“化学抗体”。与传统抗体相比，核酸适配体具有分子量小（5-15KD）、靶标范围广、免疫原性低、稳定性好、可人工合成、易修饰、成本低等特点。这些优势使得核酸适配体在生物分析、生物医学、生物技术、传感技术等众多领域展现出巨大的应用潜力。

核酸适配体传感技术凭借其高灵敏度、特异性和可重复性等优点，被广泛应用于生物医学、环境监测、食品安全等领域。然而，目前大多数核酸适配体传感技术需要使用复杂的设备和试剂，操作难度较高，成本较高，限制了其在实际应用中的推广和应用。开发一种简单、快速、高灵敏度的核酸适配体传感分析方法具有重要的研究意义和应用前景。

本研究旨在开发一种基于构象转换和聚合酶反应的核酸适配体传感分析方法，该方法能够利用核酸适配体与靶分子结合时的构象变化，以及聚合酶反应的信号放大作用，实现对靶分子的快速、高灵敏度检测。这种方法有望克服现有核酸适配体传感技术的局限性，为生物医学、环境监测、食品安全等领域的检测提供一种新的解决方案，具有重要的理论意义和实际应用价值。

1.2国内外研究现状

国内外在核酸适配体传感分析领域开展了广泛而深入的研究，取得了一系列令人瞩目的进展。在核酸适配体的筛选技术方面，不断有新的策略和方法涌现。传统的指数富集配体系统进化技术（SELEX）持续优化，筛选效率显著提升，同时，一些改进型的SELEX技术如毛细管电泳-SELEX、微流控芯片-SELEX等也应运而生，这些新技术能够在更短时间内获得高亲和力的核酸适配体，并且能够适应更复杂的靶标体系。

在传感分析方法构建上，多种信号转换方式与核酸适配体相结合，形成了丰富多样的传感平台。荧光适配体传感器通过适配体与靶物质结合后荧光值的变化对靶物质进行定量检测，具有检测快速、操作简单、灵敏性高、稳定性好和特异性强等优点。例如，Yang等建立了一种适配体-SYBRⅠ荧光探针传感体系用于检测牛奶中的四环素，在最佳条件下，检出限达1×10mg/mL。电化学适配体传感器则将生物分子和靶分子的结合过程转化为可测量的电信号，从而实现对靶物质的检测分析，因其易于修饰、易于保存、稳定性强等特点，成为目前研究最广的生物识别元件之一。此外，基于纳米材料的适配体传感器利用纳米材料独特的物理化学性质，如金纳米粒子的表面等离子体共振效应、碳纳米管的高导电性等，进一步提高了传感分析的灵敏度和选择性。

针对基于构象转换和聚合酶反应的方法，国内外研究也取得了一定成果。科研人员发现核酸适配体与靶分子结合时会发生构象转换，这种构象变化可以被巧妙地用于信号传导和检测。例如，当核酸适配体与靶分子特异性结合后，其原本的二级或三级结构发生改变，从而影响与之相连的荧光基团或电化学活性基团的信号输出。在聚合酶反应方面，通过设计合理的引物和反应条件，利用聚合酶对核酸适配体-靶分子复合物进行扩增，能够有效放大检测信号，提高检测灵敏度。一些研究将构象转换与聚合酶反应相结合，构建了新型的核酸适配体传感分析体系，实现了对小分子、蛋白质等靶标的高灵敏检测。然而，目前该领域仍存在一些问题亟待解决，如核酸适配体与靶分子的结合效率有待提高，聚合酶反应的特异性和稳定性还需进一步优化，以及复杂样品中背景干扰对检测结果的影响等。

1.3研究目标与内容

本研究旨在开发一种基于构象转换和聚合酶反应的新型核酸适配体传感分析方法，并对其在生物医学、环境监测和食品安全等领域的应用进行探索。具体研究内容包括以下几个方面：

设计和合成高亲和力核酸适配体：运用生物信息学方法，针对特定靶分子（如疾病标志物、环境污染物、食品有害成分等）设计具有潜