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流式细胞检测技术原理与应用

CATALOGUE

目录

01

技术概述

02

样本处理规范

03

数据分析体系

04

应用场景分类

05

质控管理要求

06

创新发展方向

01

技术概述

流式细胞术基本原理

流式细胞术定义

数据采集

悬浮原理

数据分析

流式细胞术是一种对细胞或亚细胞微粒进行快速定量分析和分选的技术。

细胞在液体中悬浮并通过光束，测量细胞散射光和荧光信号。

通过光电探测器接收信号，转化为电信号，再经过模数转换成为数字数据，供计算机分析。

利用统计学方法对数据进行处理，获得细胞群体的特征和分布情况。

检测系统核心组件

光源

光学系统

检测器

数据处理系统

通常采用激光或汞灯作为光源，要求光源强度稳定且单色性好。

包括聚光镜、滤光片、分光器等，用于将光源产生的光线聚焦到检测区，并分离出散射光和荧光。

光电倍增管或雪崩光电二极管等，用于将接收到的光信号转换为电信号。

包括模数转换器、计算机和数据处理软件等，用于对电信号进行放大、处理和存储。

细胞标记策略分类

细胞标记策略分类

散射光标记

无需荧光染料，直接利用细胞对光的散射特性进行标记。

侧向散射光（SSC）

主要用于反映细胞内部颗粒的多少和分布。

前向散射光（FSC）

主要用于反映细胞大小。

细胞标记策略分类

荧光与散射光联合标记

同时利用荧光和散射光信号，提高检测的灵敏度和准确性。

03

利用不同荧光染料的不同激发和发射波长，实现对细胞多个参数的标记和检测。

02

双色或多色荧光标记

多参数标记

同时采用多种标记策略，实现对细胞多个参数的检测和分析。

01

02

样本处理规范

样本制备关键步骤

细胞悬液的制备

采用机械分散、酶解或化学处理等方法，将细胞从组织中分离并悬浮于特定缓冲液中。

02

04

03

01

细胞计数与浓度调整

使用细胞计数仪对细胞进行计数，并根据实验需求调整细胞浓度。

细胞清洗与去除杂质

用缓冲液反复洗涤细胞，去除残留的细胞碎片、培养基和其他杂质。

细胞固定与透化

部分实验需要固定细胞以保持其形态，同时透化细胞膜以便抗体进入。

荧光抗体标记方法

4

标记条件优化

3

荧光素标记的抗体选择

2

间接免疫荧光法

1

直接免疫荧光法

通过调整抗体浓度、标记时间和温度等条件，以获得最佳的标记效果。

首先用未标记的抗体与细胞表面抗原结合，然后再加入荧光素标记的二抗，形成抗原-抗体-二抗复合物。

根据实验需求选择合适的荧光素标记抗体，包括抗体种类、荧光素种类和标记方法等。

将荧光素标记的抗体直接与细胞表面的抗原结合，形成抗原-抗体复合物。

样本保存与质控条件

样本保存环境

将制备好的样本置于合适的温度、湿度和光照条件下保存，以避免细胞变质或荧光猝灭。

保存剂的选择

使用特定的保存剂可以延长样本的保存时间，同时保持细胞的形态和荧光强度。

样本的质控

定期对样本进行质控检测，包括细胞形态、荧光强度和特异性等方面的检测，以确保样本质量。

样本的运输与储存

在运输和储存过程中，要注意保持样本的完整性和稳定性，避免剧烈震荡和温度变化。

03

数据分析体系

多参数数据解读标准

荧光强度

散射光

荧光波长

时间参数

流式细胞仪检测到的荧光强度与细胞中荧光物质的含量成正比，可用于定量分析细胞成分。

不同荧光染料具有特定的荧光波长，通过荧光波长可区分不同标记物。

细胞通过激光束时会产生散射光，散射光的强度与细胞大小、形态和细胞内颗粒的折射率有关。

荧光和散射光信号的时间先后顺序可用于区分细胞中不同荧光染料标记的分子。

专用分析软件功能

根据细胞的荧光、散射光等参数，将细胞分为不同群体，以便进一步分析。

细胞分群

参数计算

数据可视化

流式细胞仪产生的数据量庞大，需通过专用软件进行处理，包括数据平滑、滤波、去噪等。

软件可计算细胞群体的平均值、标准差、百分比等统计参数，以及峰高、峰面积等特征值。

将分析结果以图表、图像等形式直观展示，便于用户理解和解释。

数据处理

常见图谱判读原则

直方图

散点图

密度图

等高线图

显示细胞荧光强度或散射光强度的分布，可用于分析细胞群体的大小、形态和细胞内颗粒的折射率等。

显示两个参数之间的关系，如荧光强度与散射光强度，可用于区分不同细胞群体。

将细胞按某一参数进行染色，统计单位面积内的细胞数，可反映细胞在组织中的分布情况。

将三维数据压缩为二维图像，用于表示细胞在某一参数上的分布和变化趋势。

04

应用场景分类

临床免疫表型分析

淋巴细胞亚群分析

利用流式细胞术检测血液中不同淋巴细胞亚群的比例和数量，对于疾病的诊断和免疫功能的评估具有重要意义。

免疫监测与预后评估

通过流式细胞术监测患者免疫状态，评估患者对治疗的反应和预后情况。

白血病免疫分型

通过流式细胞术检测白血病细胞的免疫表型，辅助诊断和分型，为治疗方案的制定提供依