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eNOS基因修饰EPCs移植：开启损伤内膜修复的新征程

一、引言

1.1研究背景与意义

血管内膜作为血管壁的最内层结构，对维持血管的正常生理功能起着关键作用。一旦血管内膜遭受损伤，便会引发一系列严重的病理生理变化，进而导致多种血管内膜损伤相关疾病的发生。这些疾病严重威胁着人类的健康，给社会和家庭带来了沉重的负担。

动脉粥样硬化便是一种典型的因血管内膜损伤而引发的疾病。当血管内膜受损时，血液中的脂质成分，如低密度脂蛋白（LDL），便容易侵入内膜下。随后，LDL会被氧化修饰，形成氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）。ox-LDL具有很强的细胞毒性，它会吸引单核细胞进入内膜下，并分化为巨噬细胞。巨噬细胞通过其表面的清道夫受体大量摄取ox-LDL，逐渐转化为泡沫细胞。随着泡沫细胞的不断堆积，便会形成早期的动脉粥样硬化斑块。随着病情的发展，斑块会逐渐增大，并伴有平滑肌细胞的增殖、迁移以及细胞外基质的合成与分泌。这些变化会导致动脉管壁增厚、变硬，管腔狭窄，影响血液的正常流动。当冠状动脉发生粥样硬化时，会导致心肌供血不足，引发心绞痛、心肌梗死等严重的心血管事件；若脑动脉出现粥样硬化，则可能导致脑供血不足，引发头晕、头痛、记忆力减退等症状，甚至增加脑梗死、脑出血等脑血管意外的发生风险。据世界卫生组织（WHO）统计，心血管疾病每年导致的死亡人数在全球总死亡人数中占比颇高，而动脉粥样硬化是其主要的病理基础之一。在中国，随着人口老龄化进程的加速以及人们生活方式的改变，动脉粥样硬化相关疾病的发病率呈逐年上升趋势，如2020年中国心血管健康与疾病报告指出，心血管疾病现患人数约3.3亿，其中很大一部分患者的发病根源与动脉粥样硬化密切相关。

再如，经皮冠状动脉介入治疗（PCI）是目前治疗冠心病的重要手段之一，但术后血管内膜损伤引发的再狭窄问题却严重影响了治疗效果。PCI过程中，球囊扩张、支架植入等操作会不可避免地对血管内膜造成机械性损伤。这种损伤会激活血管内皮细胞和血小板，导致一系列炎症反应和血栓形成。炎症细胞释放的细胞因子和生长因子会刺激平滑肌细胞的增殖和迁移，使其从血管中膜向内膜迁移，并合成大量的细胞外基质。同时，血小板聚集形成的血栓会进一步促进平滑肌细胞的增殖和迁移，导致血管内膜增厚，管腔狭窄，最终引发再狭窄。据相关研究报道，PCI术后再狭窄的发生率在20%-50%之间，这不仅增加了患者再次手术的风险和医疗费用，还严重影响了患者的生活质量和预后。

内皮祖细胞（EPCs）作为内皮细胞的前体细胞，在血管内膜损伤修复过程中发挥着重要作用。正常情况下，EPCs主要存在于骨髓中。当血管内膜发生损伤时，在多种细胞因子和趋化因子的作用下，EPCs会被动员从骨髓进入外周血，并迁移至损伤部位。到达损伤部位后，EPCs会分化为成熟的内皮细胞，参与受损血管内膜的修复，从而维持血管内皮的完整性。此外，EPCs还可以分泌多种细胞因子和生长因子，如血管内皮生长因子（VEGF）、一氧化氮（NO）等，这些因子可以促进血管新生、抑制炎症反应和血小板聚集，进一步促进血管内膜的修复。然而，在一些病理状态下，如动脉粥样硬化、糖尿病等，EPCs的数量和功能会受到抑制，导致其对血管内膜损伤的修复能力下降。

内皮型一氧化氮合酶（eNOS）基因在血管生理过程中也扮演着至关重要的角色。eNOS基因编码产生的eNOS酶主要存在于血管内皮细胞中。在正常生理状态下，当血管内皮细胞受到适当的刺激，如血流剪切应力、某些神经递质（如乙酰胆碱）等，细胞内钙离子浓度会瞬间升高，钙离子与钙调蛋白结合形成Ca2?-钙调蛋白复合物，进而激活eNOS。eNOS能够催化底物L-精氨酸发生氧化反应，生成一氧化氮（NO）和L-瓜氨酸。NO作为一种重要的气体信号分子，在维持血管稳态方面发挥着关键作用。它具有强大的舒张血管平滑肌的能力，可以迅速扩散到邻近的血管平滑肌细胞，与细胞内的鸟苷酸环化酶结合，促使该酶将三磷酸鸟苷（GTP）转化为环磷酸鸟苷（cGMP），cGMP作为第二信使，通过激活蛋白激酶G（PKG），使血管平滑肌细胞舒张，从而降低血管阻力，维持正常的血压和血流灌注。NO还具有抑制血小板聚集、抗血栓形成的作用，能够防止血小板在血管壁上黏附、聚集，避免血栓的形成，维持血液的正常流动；同时，NO可以抑制炎症细胞的黏附和迁移，减少炎症因子的释放，从而减轻血管壁的炎症反应，抑制动脉粥样硬化斑块的形成和发展。研究表明，eNOS基因表达水平的变化与血管内膜损伤相关疾病的发生发展密切相关。当eNOS基因表达下调或eNOS酶活性降低时，血管内皮细胞产生NO的能力下降，会导致血管舒张功能受损，血管收缩相对增强，血压升高，增加血管壁的机械应力；血小板容易在血