微生物限度检查操作规程.docVIP

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操作标准

文件名称

微生物限度检查操作规程

起草人

起草日期

年月日

审核人

审核日期

年月日

质量部审核人

审核日期

年月日

批准人

批准日期

年月日

颁发部门

质量部

生效日期

年月日

分发部门

总经理[]份质量部[]份生产部[]份EHS管理部[]份

工程部[]份物资部[]份动物实验室[]份中药提取车间[]份

商务部[]份仓储[]份药物警戒部[]份质量控制实验室[]份

财务部[]份行政部[]份技术研发部[]份大容量注射剂车间[]份

变更内容

修订号修订原因与内容执行日期

01年月日

1目的

建立非无菌制剂及其原料、辅料、中间产品和直接接触药物的包装材料的微生物限度检查操作方法，确保实验结果的准确性。

2适用范围

本标准适用于非无菌制剂及其原料、辅料、中间产品和直接接触药物的包装材料的微生物限度检查。

3引用标准

《中国药典》

《中国药品检验标准操作规范》

《中国药典分析检测技术指南》

4职责

质量控制实验室化验员：负责该规程的起草。

质量部经理：负责该规程的审核。

总经理：负责该规程的批准。

内容

5.1含义

微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。

概述

当本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合相应的微生物限度标准时，应按下述规定进行检验，包括样品的取样量和结果的判断等。微生物限度检查环境应符合要求，检验全过程必须严格遵守无菌操作，防止再污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。单向流空气区域、工作台面及环境应定期进行监测。

5.3环境、仪器、设备、试剂试液、培养基、对照菌液和用具

5.3.1微生物限度检查室的环境

5.3.1.1操作间

本公司质量控制实验室微生物限度检查室为C级环境，检验操作在超净工作台进行，超净工作台内为A级环境。

——沉降菌测定

超净工作台消毒擦拭后，先启动层流净化装置并紫外灯30min，将备妥的胰酪大豆胨琼脂平板3个（经30～35℃预培养2天，证明无菌落生长），以无菌方式（或经传递箱）移入操作台中，置净化台左、中、右各一个，开盖，暴露30min后，将盖盖上，在30～35℃培养箱内倒置培养3天，取出检查。3个平板生长的平均菌数不超过1个。

5.3.1.2在每次操作前、后，用75%乙醇或70%异丙醇消毒液擦拭操作台及可能污染的死角。然后启动层流净化装置，同时用紫外杀菌灯照射30min。

5.3.2试剂试液

5.3.2.1消毒剂

75%乙醇溶液或70%异丙醇溶液（供手消毒、擦拭操作台面用）。

5.3.2.2稀释剂和试剂（稀释剂配制后，脉动真空灭菌柜灭菌）

0.9%无菌氯化钠溶液、pH7.0无菌氯化钠—蛋白胨缓冲液。

5.3.3培养基

胰酪大豆胨琼脂培养基、沙氏葡萄糖琼脂培养基、沙氏葡萄糖液体培养基

胰酪大豆胨液体培养基、麦康凯琼脂培养基、麦康凯液体培养基、RV沙门增菌液体培养基、木糖赖氨酸脱氧胆酸盐琼脂培养基、三糖铁琼脂培养基。

5.3.4仪器、设备及用具

5.3.4.1超净工作台、脉动真空灭菌柜、显微镜（1600×）、恒温水浴锅、冰箱、紫外灯、生化培养箱（30～35℃）、生化培养箱（20～25℃）、电热鼓风干燥箱、0.45μm滤膜及薄膜过滤器、电子天平（感量0.1g）。

5.3.4.2玻璃器皿：锥形瓶（250ml，500ml，1000ml），培养皿（φ90mm、φ55mm）、量筒（10ml,100ml，250ml，1000ml）、试管（35ml，50ml）及塞、无热原吸头（1ml，0.1ml）、注射器（5ml或10ml等）、注射针头、载玻片、盖玻片。玻璃器皿用前应洗涤干净，量筒不挂水滴，无残留抗菌物。

锥形瓶、量筒、试管均应加硅胶塞，若用快速混匀器制备混悬液时，尚需用锡纸包裹瓶塞，以免振荡时供试液污染瓶塞。玻璃器皿，均于脉动真空灭菌柜121℃灭菌30min，烘干或250℃干热灭菌1h，备用。

5.3.4.3用具大、小橡胶头（放于干净带盖的容器中，并应定期用75%乙醇