细胞生物学技术细胞转染与传代.ppt

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细胞转染和传代;关于转染(transfection);物理介导:电穿孔法、显微注射

化学介导:磷酸钙共沉淀法、脂质体转染方法

生物介导:病毒介导法;细胞转染的类型;转染对细胞的要求:

细胞生长状态决定了基因转染效率。如为贴壁生长的细胞,一般要求在转染前一日,重新接种于培养皿或瓶,细胞密度以铺满培养器皿的60%为宜;转染当日,在转染前4小时换新鲜培养液。对于悬浮细胞,也需在转染前4小时换新鲜培养液。

转染对DNA的要求:

用于转染的质粒DNA必须无蛋白质,无RNA和其了化学物质的污染,OD260/280比值应在1.8以上。

;报告基因编码的蛋白质非常容易被鉴定,因此常

被用来检测目的基因表达

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