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2026-01-03 发布于黑龙江
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抗原特异性T细胞筛选技术体系.pptx

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抗原特异性T细胞筛选技术体系

演讲人：

日期:

CONTENTS

基础概念与筛选意义

核心筛选技术方法

实验操作流程

表型与功能鉴定

应用场景拓展

技术挑战与优化方向

基础概念与筛选意义

T细胞受体识别机制

辅助受体作用

CD4和CD8等辅助受体参与TCR与抗原的结合过程，增强识别能力。

TCR与抗原结合后，T细胞被激活，产生特异性免疫反应。

受体与抗原结合

T细胞受体（TCR）多样性

T细胞表面TCR具有高度多样性，可识别多种抗原。

抗原特异性定义标准

T细胞仅对特定抗原产生反应，具有高度的抗原特异性。

特异性识别

T细胞对抗原的应答强度受多种因素影响，包括抗原剂量、T细胞数量等。

免疫应答强度

T细胞对抗原的识别具有记忆性，可长期保持对抗原的特异性反应。

免疫记忆

临床应用价值解析

感染性疾病诊断

通过检测T细胞对抗原的特异性反应，诊断感染性疾病。

免疫疗法

利用T细胞的抗原特异性，开发针对特定疾病的免疫疗法，如CAR-T细胞疗法。

移植排斥反应监测

在器官移植中，监测T细胞对抗原的特异性反应，预测和防治移植排斥反应。

核心筛选技术方法

流式细胞术分选策略

利用流式细胞术对细胞进行多参数定量分析和分选，根据细胞表面标志和细胞内细胞因子等特征进行筛选。

基本原理

优点

缺点

高速度、高灵敏度、高准确性、可重复性强，可同时检测多种细胞类型。

设备昂贵、操作复杂、需要专业技术人员进行操作和维护。

ELISPOT检测原理

基本原理

通过检测T细胞分泌的特异性抗体或细胞因子，在固相载体上形成斑点，对T细胞进行特异性筛选。

优点

缺点

灵敏度高、特异性强、可检测低频率的特异性T细胞，且可同时检测多种特异性T细胞。

操作复杂、耗时长、成本较高，对实验条件和环境要求严格。

四聚体标记技术

利用特异性抗体与T细胞表面受体结合，形成四聚体复合物，从而直接识别T细胞的特异性。

基本原理

特异性强、灵敏度高，可用于检测特异性T细胞的频率和功能。

优点

制备复杂、成本较高，且仅适用于已知特异性抗原的T细胞筛选。

缺点

实验操作流程

样本预处理规范

样本保存

确保样本在适宜的温度和条件下保存，避免样本变质或污染。

将样本进行适当处理，如细胞分离、破碎、灭活等，以便后续实验。

样本处理

采集样本

选择适当的组织或细胞样本，如血液、组织、培养细胞等。

抗原刺激条件优化

根据实验目的选择合适的抗原，包括蛋白质、多肽、小分子化合物等。

抗原选择

刺激条件设置

阳性对照设置

确定抗原的浓度、刺激时间、培养环境等条件，以获取最佳的T细胞激活效果。

设置阳性对照实验，验证抗原的刺激效果及实验体系的稳定性。

细胞培养监测要点

细胞状态监测

定期观察细胞生长状态，如细胞形态、数量、活性等，确保细胞正常生长。

培养基更换

定期更换培养基，保证细胞获得充足的营养和生长因子。

污染控制

严格控制实验环境中的微生物污染，如细菌、真菌、支原体等，确保实验的准确性。

表型与功能鉴定

表面标志物检测组合

CD3

T细胞表面标志物，确认T细胞的存在。

CD4和CD8

辅助性T细胞和细胞毒性T细胞的表面标志物，区分T细胞亚群。

CD28和CD95

T细胞活化和凋亡相关标志物，评估T细胞的活化状态和凋亡敏感性。

CD45RA和CD45RO

区分初始T细胞和记忆T细胞的标志物，有助于分析T细胞分化状态。

IFN-γ分泌

Th1细胞的主要细胞因子，参与细胞免疫应答。

IL-4分泌

Th2细胞的主要细胞因子，参与体液免疫应答。

IL-17分泌

Th17细胞的主要细胞因子，参与炎症反应和自身免疫疾病。

IL-2分泌

T细胞生长因子，促进T细胞的增殖和活化。

细胞因子分泌分析

增殖能力评估模型

CFSE染色法

BrdU掺入法

细胞计数法

细胞周期测定

通过荧光染料标记细胞，追踪细胞分裂情况，评估增殖能力。

利用BrdU掺入新合成DNA的特性，检测细胞增殖情况。

直接计数细胞数量，评估增殖能力。

通过测定细胞周期各阶段比例，了解细胞增殖状态。

应用场景拓展

肿瘤免疫治疗研究

筛选肿瘤相关抗原特异性T细胞

利用该技术体系可以从患者体内筛选出针对特定肿瘤相关抗原的T细胞，进而用于肿瘤免疫治疗。

评估免疫治疗效果

个性化治疗方案

通过检测特异性T细胞的数量和活性，可以评估免疫治疗的效果，为临床治疗方案提供指导。

该技术体系可以针对不同患者的肿瘤相关抗原，筛选出个性化的T细胞治疗方案，提高治疗效果。

该技术体系可以用于筛选针对特定病原体的特异性T细胞，实现感染性疾病的早期诊断和监测。

感染性疾病监测

病原体特异性T细胞

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