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mRNA疫苗技术要点

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CATALOGUE

02

序列设计与优化

03

递送系统

04

生产工艺

05

免疫应答机制

06

临床应用考量

01

技术原理

01

技术原理

PART

mRNA结构基础

mRNA的5端添加甲基化帽（Cap1结构），保护核酸外切酶降解并增强翻译起始效率，同时通过结合eIF4E因子招募核糖体。

5端帽结构

编码目标抗原蛋白的序列经过密码子优化，提高翻译效率并避免二级结构形成，确保核糖体顺利滑动。

开放阅读框（ORF）

长度通常为100-150个腺苷酸，结合Poly(A)结合蛋白（PABP）稳定mRNA并协同5帽激活环化翻译机制。

3端Poly(A)尾

5和3UTR采用α-珠蛋白或β-珠蛋白等保守序列，调控mRNA半衰期和翻译活性，避免免疫过度激活。

非翻译区（UTR）优化

靶向抗原设计机制

抗原选择与表位预测

通过生物信息学分析病原体表面蛋白（如SARS-CoV-2刺突蛋白），筛选高保守性且能引发中和抗体的B/T细胞表位。

构象稳定化改造

采用脯氨酸置换或二硫键锁定技术（如S-2P设计），使抗原维持预融合状态，增强免疫原性。

跨物种免疫兼容性验证

通过体外实验（假病毒中和试验）和动物模型验证抗原设计的交叉保护能力，确保对不同变异株有效。

自扩增mRNA（saRNA）技术

部分疫苗搭载阿尔法病毒复制酶基因，延长抗原表达时间并降低剂量需求。

细胞内蛋白表达流程

脂质纳米颗粒（LNP）递送

mRNA包裹于可电离脂质体中，通过内吞作用进入细胞，内体逃逸后释放mRNA至胞质。

翻译与修饰

游离核糖体识别mRNA并启动翻译，新生肽链经内质网-高尔基体折叠糖基化，形成功能性抗原蛋白。

抗原呈递途径

内源性蛋白通过MHCI类分子递呈至细胞表面，激活CD8+T细胞；分泌型抗原被APC摄取后通过MHCII类途径激活CD4+T细胞。

免疫记忆形成

生发中心内B细胞经历亲和力成熟，产生长效浆细胞和记忆B细胞，提供持久保护。

02

序列设计与优化

PART

密码子优化策略

高频密码子替换

通过将低频密码子替换为宿主细胞偏好的高频密码子，显著提升mRNA翻译效率，确保目标蛋白的高效表达。

调控GC含量

平衡GC碱基比例以增强mRNA稳定性，同时避免过高GC含量导致转录或翻译效率下降。

减少二级结构干扰

优化序列以减少mRNA分子内碱基配对形成的二级结构，降低核糖体停滞风险，保证翻译过程的连续性。

核苷酸化学修饰

假尿苷（Ψ）替代尿苷

通过引入假尿苷降低mRNA的免疫原性，减少宿主先天免疫系统的识别与降解，延长mRNA半衰期。

5-甲基胞苷（m5C）修饰

修饰胞嘧啶碱基以增强mRNA稳定性，同时抑制免疫受体（如TLR7/8）的激活，避免过度炎症反应。

硫代磷酸骨架修饰

替换磷酸二酯键中的非桥接氧原子为硫原子，提高mRNA对核酸酶的抵抗能力，延长体内作用时间。

稳定性增强技术

5帽结构优化

采用抗解帽酶的三磷酸帽类似物（如CleanCap），保护mRNA免受外切酶降解，并促进翻译起始复合物的形成。

3端多聚腺苷酸尾延长

脂质纳米颗粒（LNP）包裹

通过添加50-150个腺苷酸残基，增强mRNA的核质转运效率，并与poly(A)结合蛋白协同稳定mRNA分子。

利用可电离脂质、胆固醇等成分形成保护性载体，防止mRNA被血清核酸酶降解，并促进细胞摄取与内体逃逸。

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03

递送系统

PART

脂质纳米粒(LNP)构成

电荷调节与pH响应性

通过优化脂质比例和化学结构，实现mRNA在胞内高效释放，同时避免溶酶体降解，提升转染效率。

辅助脂质

包括胆固醇、磷脂和PEG修饰脂质，胆固醇增强LNP结构稳定性，磷脂调节膜流动性，PEG修饰脂质减少免疫清除并延长循环时间。

可电离脂质

作为LNP的核心成分，可电离脂质在酸性条件下带正电荷，与带负电的mRNA结合形成复合物，同时在中性生理环境下保持稳定，确保递送效率。

LNP包封率控制

微流控混合技术

采用精确的流速和混合比例，使脂质与mRNA在纳米尺度均匀结合，包封率可达90%以上，减少游离mRNA的免疫原性风险。

梯度透析纯化

通过调整盐浓度和pH值，选择性去除未包封的mRNA，同时保留完整的LNP-mRNA复合物，确保制剂纯度。

动态光散射监测

实时检测LNP粒径分布和包封状态，优化工艺参数以平衡包封率与颗粒均一性。

靶向递送效率提升

组织特异性配体修饰

在LNP表面偶联抗体或肽段，如肝细胞靶向的GalNAc配体，增强特定细胞的内吞作用，降低非特异性分布。

免疫逃逸设计

通过PEG化或隐形脂质减少巨噬细胞吞噬，延长血液循环时间，提高靶组织累积量。

内体逃逸增强剂

添加内体破坏肽或质子海绵材料，促进LNP从内体逃逸至胞质，加速mRNA释放与表达。

04

生产工艺