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基于miR-132-3p调控的芝麻酚对氟化物诱导小鼠认知障碍的改善机制及新型功能产品研发探索

摘要

氟化物在环境中广泛存在，过量摄入氟化物会导致小鼠认知障碍等健康问题。芝麻酚作为一种具有多种生物活性的天然化合物，可能对氟化物诱导的认知障碍具有改善作用。本研究旨在探讨基于miR-132-3p调控的芝麻酚对氟化物诱导小鼠认知障碍的改善机制，并在此基础上探索新型功能产品的研发。通过动物实验、细胞实验以及分子生物学技术，研究芝麻酚对小鼠认知功能、神经病理变化、miR-132-3p表达及相关信号通路的影响。结果表明，芝麻酚通过调控miR-132-3p表达，影响下游信号通路，从而改善氟化物诱导的小鼠认知障碍。基于此研究结果，进一步开展新型功能产品的研发，为防治氟化物相关认知障碍提供新的思路和产品。

关键词

芝麻酚；miR-132-3p；氟化物；认知障碍；新型功能产品

一、引言

1.1氟化物与认知障碍

氟化物是一种在自然界中广泛分布的无机化合物，在饮用水、工业污染、含氟农药和药物等中都有存在。适量的氟化物对人体健康有益，如预防龋齿等。然而，长期过量摄入氟化物会导致氟中毒，对人体多个系统造成损害，其中神经系统是重要的靶器官之一。大量研究表明，氟化物暴露可引起小鼠认知障碍，表现为学习记忆能力下降、空间认知能力减退等。其机制可能与氟化物引起的氧化应激、神经炎症、神经递质失衡以及神经细胞凋亡等有关。

1.2芝麻酚的生物活性

芝麻酚是从芝麻中提取的一种天然酚类化合物，具有抗氧化、抗炎、抗肿瘤、神经保护等多种生物活性。近年来，越来越多的研究关注到芝麻酚在神经系统疾病中的潜在治疗作用。芝麻酚可以通过清除自由基、抑制氧化应激反应、调节神经递质水平等方式，保护神经细胞免受损伤，改善神经功能。

1.3miR-132-3p在神经系统中的作用

微小RNA（miRNA）是一类长度约为22个核苷酸的非编码RNA，通过与靶mRNA的互补配对结合，抑制mRNA的翻译或促进其降解，从而调控基因表达。miR-132-3p在神经系统中高度表达，参与神经元的发育、分化、突触可塑性以及学习记忆等过程。研究发现，miR-132-3p的表达异常与多种神经系统疾病相关，包括认知障碍。

1.4研究目的和意义

本研究旨在探讨芝麻酚是否可以通过调控miR-132-3p的表达，改善氟化物诱导的小鼠认知障碍，并深入研究其作用机制。同时，基于研究结果，探索开发新型功能产品，为防治氟化物相关认知障碍提供有效的干预措施，具有重要的理论和实际应用价值。

二、材料与方法

2.1实验动物

选用健康的雄性C57BL/6小鼠，体重20-25g，购自[动物供应商名称]。小鼠饲养于温度（22±2）℃、湿度（50±5）%的环境中，自由饮食和饮水，适应性饲养1周后进行实验。

2.2主要试剂和仪器

芝麻酚（纯度≥98%）购自[试剂供应商名称]；氟化钠（NaF）购自[试剂供应商名称]；miR-132-3p模拟物、抑制剂及阴性对照购自[生物公司名称]；RNA提取试剂盒、反转录试剂盒、荧光定量PCR试剂盒购自[试剂供应商名称]；Westernblot相关试剂购自[试剂供应商名称]；Morris水迷宫、旷场实验箱等行为学检测设备购自[仪器供应商名称]。

2.3实验分组及处理

将小鼠随机分为4组，每组10只：

-对照组：正常饲养，饮用去离子水。

-氟化物模型组：饮用含100mg/LNaF的去离子水，连续处理8周。

-芝麻酚治疗组：在饮用含100mg/LNaF的去离子水的同时，每天灌胃给予芝麻酚（50mg/kg），连续处理8周。

-miR-132-3p干预组：在芝麻酚治疗组的基础上，于实验第4周开始，通过侧脑室注射miR-132-3p抑制剂或模拟物，每周注射1次，连续注射4周。

2.4行为学检测

-Morris水迷宫实验：在实验第8周进行，用于检测小鼠的空间学习记忆能力。实验分为定位航行实验和空间探索实验两个阶段。定位航行实验连续进行5天，记录小鼠找到隐藏平台的潜伏期；空间探索实验在定位航行实验结束后的第1天进行，记录小鼠在原平台所在象限的停留时间和穿越原平台位置的次数。

-旷场实验：在实验第8周进行，用于检测小鼠的自主活动能力和焦虑水平。将小鼠放入旷场实验箱中，记录其在5分钟内的活动总路程、中央区域停留时间等参数。

2.5组织取材与处理

行为学检测结束后，将小鼠麻醉，心脏灌注生理盐水后，迅速取出脑组织。一部分脑组织用于制备组织匀浆，检测氧化应激指标、神经递质水平等；另一部分脑组织用于RNA提取和蛋白质提取，分别进行miR-132-3p表达检测和相关蛋白表达检测。

2.6氧化应激指标