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现代遗传学实验题库及解析

引言

现代遗传学实验是连接遗传学理论与实践的桥梁，也是培养学生科研思维、动手能力和创新精神的关键环节。本题库及解析旨在为遗传学学习者提供一个系统的实践能力自测与提升平台。题目涵盖了从经典的分子操作到新兴的基因编辑等多个层面，力求反映现代遗传学研究的核心技术与常见问题。解析部分不仅提供答案，更侧重于原理阐释、操作要点及潜在问题分析，希望能帮助读者真正理解实验背后的逻辑，而非仅仅记住步骤。

第一部分：核酸的提取与定性定量分析

实验一：基因组DNA的提取与鉴定

题目1：在采用CTAB法提取植物基因组DNA的过程中，CTAB试剂的主要作用是什么？为何通常需要在65℃水浴保温？

解析：CTAB（十六烷基三甲基溴化铵）是一种阳离子去污剂。其主要作用在于：其一，它能溶解细胞膜及核膜，并使蛋白质变性沉淀，从而释放出细胞内的核酸物质；其二，CTAB能与植物组织中富含的多糖等杂质结合形成复合物，在高盐浓度条件下可沉淀下来，从而与DNA分离。

65℃水浴保温这一步骤，主要目的是促进CTAB更好地溶解细胞膜和核膜结构，同时也能抑制某些内源核酸酶的活性，减少DNA在提取过程中的降解。此外，较高温度也有助于多糖与CTAB形成更稳定的复合物，提高后续去除多糖杂质的效率。

题目2：提取得到的基因组DNA，经紫外分光光度计检测，A260/A280比值为1.5，A260/A230比值为1.2。请分析此DNA样品的质量，并提出可能的改进措施。

解析：通常认为，高质量的DNA样品A260/A280比值应在1.8左右，若低于此值，如本题中的1.5，提示样品中可能含有较多的蛋白质或酚类杂质污染。A260/A230比值理想情况下应大于2.0，本题中1.2的数值偏低，表明样品可能存在盐离子、碳水化合物或有机溶剂（如乙醇、异丙醇）残留。

改进措施方面：针对蛋白质污染，可增加酚-氯仿-异戊醇抽提的次数，确保离心后吸取水相时避免触及中间蛋白层；若怀疑酚残留，可在氯仿抽提后增加一次纯氯仿抽提。对于盐离子或小分子杂质，可通过增加70%-75%乙醇洗涤的次数和时间来改善，洗涤时应确保DNA沉淀完全悬浮于乙醇中。此外，在沉淀DNA时，严格控制无水乙醇或异丙醇的用量及沉淀时间、温度，也有助于提高DNA纯度。

实验二：总RNA的提取与完整性检测

题目1：为何在提取RNA时，实验环境、器械及试剂都需要特别强调无RNA酶（RNase）污染？常用的去除或抑制RNase活性的方法有哪些？

解析：RNA分子相较于DNA更不稳定，极易被RNase降解。RNase广泛存在于环境中（如皮肤、唾液、灰尘），且具有极高的耐热性和稳定性，常规的高温高压灭菌有时难以将其完全灭活。一旦RNA样品被RNase污染，将导致RNA降解，实验失败。因此，无RNase环境是保证RNA提取质量的前提。

常用的RNase去除或抑制方法包括：

1.使用无RNase的耗材：如一次性的RNase-free离心管、吸头，或对重复使用的玻璃器皿进行180℃以上干热灭菌数小时。

2.试剂处理：关键试剂（如水、缓冲液）需用DEPC（焦碳酸二乙酯）处理后高压灭菌，DEPC能共价修饰RNase的活性位点而使其失活。

3.操作环境：在超净工作台内操作，佩戴一次性手套并勤更换，避免徒手接触耗材内壁和试剂瓶口。

4.添加RNase抑制剂：在RNA提取和后续反应体系（如反转录）中加入RNase抑制剂（如RNasin）。

5.胍盐等强变性剂：在细胞裂解液中加入异硫氰酸胍、盐酸胍等，可迅速变性并灭活RNase。

题目2：简述琼脂糖凝胶电泳检测总RNA完整性的原理。若电泳结果显示28SrRNA条带亮度约为18SrRNA条带的两倍，且无明显弥散，说明什么？若仅能看到一条模糊的亮带，可能的原因是什么？

解析：真核生物总RNA中，rRNA占绝大部分（约80-85%），其中28SrRNA和18SrRNA是两种主要的rRNA，它们的分子量不同（在哺乳动物中，28SrRNA约5kb，18SrRNA约2kb）。在变性琼脂糖凝胶电泳中，RNA分子因其大小和构象不同而泳动速率不同，从而分离成不同的条带。

若电泳结果显示28SrRNA条带亮度约为18SrRNA条带的两倍，且条带清晰锐利，无明显拖尾或弥散现象，通常表明所提取的总RNA完整性良好，未发生明显降解。这是因为完整的RNA中，28SrRNA的含量约为18SrRNA的两倍。

若仅能看到一条模糊的亮带，可能的原因包括：

1.RNA严重降解：提取过程中RNase污染未控制好，导致28S和18SrRNA均被降解，形成大小不一的小片段RNA，电泳时呈现弥散的亮带。

2.上样量过大或电泳条件不当：导致条带过载、分辨率降低而模糊。

3.RNA样