HB101感受态大肠杆菌用户手册V1.0.pdfVIP

用户手册

版本1.0修订日期：

09/19/2013

产品名称：HB101感受态大肠杆菌

货号：HB‑100,HB‑196

描述：

高稳定性，高效率，无需热休克。仅用于研究。

应用：

适用克隆和放大应用。•HB101菌株是一种K12xB杂交细菌，含有recA13突变，可最小化重组并有

助于片段的稳定性。此外，它携带hsdS20(rB‑mB‑)限制性减型型，防止内源性限制酶切割克隆。

HB101菌株不支持用于蓝白筛选的Alpha互补。使用pUC18控制时，转化效率约为1.0x107~1.0x109

cfu/μg。

推荐条件：

Thi本产品应在‑80°C。使用前仅在冰上解冻。不要重新冷冻。.

推荐反应条件：

将与感受态细胞•在室温下

静置5分钟•直接平板•

型：

F‑mcrBmrrhsdS20(rB‑mB‑)recA13leuB6ara‑14proA2lacY1galK2xyl‑5mtl‑1rpsL20(SmR)glnV44λ-

协议：

了一种pUC19质粒溶液（0.1μg/ml）作为对照，以确定转化效率。为了获得最大效率，实验必须不含

酚、乙醇、蛋白质和洗涤剂。1.在湿冰上解冻感受态细胞。将所需数量的已灭菌1.5毫升微量离心管放在湿冰上。

2.轻轻混合细胞，然后将50μl的感受态细胞分装到冷却的微量离心管中。（如果需要，可以进行100μl的转化。）

3.在干冰/乙醇浴中将未使用的细胞重新冷冻5分钟，然后再放回‑70°C的冰箱中。不要使用液氮。

4.为了确定转化效率，在含有50μl感受态细胞的一个试管中加入5μl（500pg）对照pUC19。在分配过程中，将移液器穿

过细胞。轻轻敲打试管以混合。

5.将1‑3μl（1‑10ng的）的连接反应液直接加入到含有50μl感受态细胞的第二个管中，在加样过程中将移液器穿

过细胞。轻轻敲击试管以混匀。

6.在冰上孵育细胞30分钟。

7.热休克细胞在37°C下孵育20秒。（如果使用100‑μl转化反应，热休克45秒）.

11650872‑()‑0245

UserManual

Version1.0

RevisionDate:09/19/2013

Productname:HB101CompetentE.Coli

Cat#:HB-100,HB-196

Description:

Highstability,highefficiency,noheatshocknecessary.ForResearchUseOnly.

Application:

•Idealforsub-cloningandscale-upapplications

•HB101strainisahybridK12xBbacterium,containingtherecA13mutationthatminimizesrecombina-

tionandaidsininsertstability.Inaddition,itcar