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高效液相含量测定课件

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目录

01.

高效液相色谱法基础

03.

高效液相色谱分析方法

05.

高效液相色谱法的挑战与展望

02.

高效液相色谱仪操作

06.

高效液相色谱法教学与实践

04.

高效液相含量测定实例

高效液相色谱法基础

PARTONE

原理与组成

高效液相色谱法利用混合物中各组分在固定相和流动相之间分配系数的差异进行分离。

色谱分离原理

流动相的组成和pH值对分离效率和检测灵敏度有重要影响，需根据样品特性精心选择。

流动相的选择

检测器用于检测色谱柱流出物中的组分，常见的有紫外-可见光谱检测器和质谱检测器。

检测器的作用

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液相色谱类型

反相液相色谱使用非极性固定相和极性流动相，广泛应用于有机分子的分离和分析。

反相液相色谱

正相液相色谱采用极性固定相和非极性流动相，适合分离极性化合物，如糖类和氨基酸。

正相液相色谱

离子交换色谱基于样品中离子与固定相上离子交换基团的相互作用，常用于蛋白质和核酸的分离。

离子交换色谱

尺寸排阻色谱依据分子大小进行分离，适用于聚合物和生物大分子的分子量测定。

尺寸排阻色谱

应用领域

高效液相色谱法广泛应用于药物成分的分析和质量控制，确保药品安全有效。

医药行业

01

HPLC用于检测水和土壤中的污染物，如农药残留、重金属等，保障环境安全。

环境监测

02

在食品工业中，HPLC用于测定食品中的添加剂、维生素和营养成分，保证食品质量。

食品工业

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高效液相色谱仪操作

PARTTWO

仪器结构与功能

高效液相色谱仪的高压泵负责输送流动相，保证分析过程中的稳定性和重现性。

高压泵系统

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检测器用于检测分离后的组分，常见的有紫外-可见光谱检测器和荧光检测器。

检测器组件

自动进样器可以提高分析效率，减少人为误差，确保样品的准确和重复进样。

自动进样器

色谱柱是分离混合物的关键部件，不同材质和尺寸的柱子适用于不同类型的分析需求。

色谱柱

样品准备与注入

从复杂基质中提取目标化合物，并通过适当的方法进行纯化，以确保样品适合分析。

样品的提取与纯化

将提取的样品溶解在适当的溶剂中，并根据需要进行稀释，以达到色谱仪的最佳检测浓度。

样品的溶解与稀释

使用自动或手动注射器将样品准确注入色谱仪的进样系统，确保注入量的精确性和重复性。

样品注入技术

评估样品在储存和分析过程中的稳定性，以避免降解或变化影响测定结果的准确性。

样品稳定性评估

检测器的使用

01

根据分析物的性质选择紫外、荧光或质谱检测器，以获得最佳检测效果。

选择合适的检测器类型

02

调整检测器的波长、流速等参数，确保检测的灵敏度和准确性。

检测器参数设置

03

定期使用标准溶液校准检测器，保证检测结果的准确性和重复性。

检测器的校准

04

定期清洁检测器的流通池，更换易耗品，以延长检测器的使用寿命。

检测器的维护

高效液相色谱分析方法

PARTTHREE

分析条件的优化

根据样品的极性和色谱柱的特性选择适宜的流动相，以提高分离效率和检测灵敏度。

选择合适的流动相

通过实验确定最佳柱温，以改善峰形、提高分辨率，同时减少分析时间。

优化柱温设置

流速对分离效果和分析时间有显著影响，通过优化流速可以达到更好的分析效果。

调整流速参数

标准曲线的绘制

01

选择纯度高、稳定性好的对照品，确保标准曲线的准确性和可靠性。

02

通过稀释对照品制备不同浓度的样品，为绘制标准曲线提供数据点。

03

使用高效液相色谱仪对每个浓度的样品进行分析，记录保留时间和峰面积。

04

利用峰面积与浓度数据进行统计分析，通过软件工具绘制并拟合标准曲线。

05

通过测定曲线的线性范围，确保在该范围内曲线可用于未知样品的含量测定。

选择合适的对照品

制备一系列浓度梯度的样品

进行高效液相色谱分析

数据处理与曲线拟合

验证曲线的线性范围

数据处理与分析

通过积分软件计算色谱图中的峰面积，以确定样品中各组分的含量。

峰面积积分

使用已知浓度的标准品来确定校正因子，进而准确计算未知样品中目标化合物的浓度。

校正因子应用

利用已知物质的保留时间与样品中的峰进行对比，辅助定性分析。

保留时间对比

采用高效液相色谱法同时分析多种组分，通过特定算法分离和定量混合样品中的各个成分。

多组分分析

高效液相含量测定实例

PARTFOUR

药品含量测定

通过高效液相色谱法测定维生素C片剂中的活性成分含量，确保产品质量和疗效。

维生素C片剂测定

对心脏药物如阿司匹林进行高效液相含量测定，确保药物在治疗剂量范围内的有效性。

心血管药物检测

利用HPLC技术对青霉素等抗生素进行含量测定，监控药物纯度和浓度，保障用药安全。

抗生素类药物分析

食品添加剂测定

测定防腐剂含量

使用高效液相色谱法测定食品中的苯甲酸和山梨酸含量，确保食品安全标