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整合素α4β7高亲和性人源单克隆抗体：筛选策略与功能验证的深度探索

一、引言

1.1研究背景与意义

整合素α4β7是一种在淋巴细胞表面表达的异二聚体跨膜蛋白，由α4和β7亚基组成。在生理状态下，它起着至关重要的作用，尤其是在淋巴细胞归巢过程中。淋巴细胞归巢是指淋巴细胞选择性迁移到特定淋巴器官或组织的过程，这一过程对于维持机体正常免疫功能至关重要。整合素α4β7通过与粘膜地址素细胞粘附分子-1（MAdCAM-1）特异性结合，介导淋巴细胞向肠道相关淋巴组织（GALT）的运输，使得淋巴细胞能够精准地到达肠道，执行免疫防御任务，如抵御肠道病原体入侵、维持肠道免疫稳态等。

然而，在病理状态下，整合素α4β7的异常表达和活化与多种疾病的发生发展密切相关。在炎症性肠病（IBD），包括克罗恩病和溃疡性结肠炎中，患者肠系膜血管中淋巴细胞粘附和迁移受阻，导致淋巴细胞不受控制地聚集在肠道，而整合素α4β7与高内皮小静脉（HEV）的MAdCAM-1间的相互作用在此过程中起着关键作用。其表达升高和异常活化会加重肠道炎症的发展，使得肠道免疫平衡被打破，炎症因子大量释放，损伤肠道黏膜组织。在艾滋病的发病机制中，肠道相关淋巴组织（GALT）是HIV-1复制的主要部位，高表达α4β7的CD4+T细胞更容易受到HIV-1的生产性感染，HIV-1包膜蛋白gp120可与α4β7结合，导致CD4+T细胞LFA-1快速激活，从而促进HIV-1的高效细胞间传播。

高亲和性人源单克隆抗体对于疾病治疗具有重要意义。以维得利珠单抗为例，作为一种人源化单克隆抗体，它特异性拮抗α4β7整合素，可与α4β7整合素特异性结合，阻断其与MAdCAM-1相互作用，抑制记忆T淋巴细胞穿过内皮迁移至胃肠道的炎症组织，从而减轻肠道炎症，且避免了系统性免疫抑制带来的全身不良反应，在治疗溃疡性结肠炎和克罗恩病等IBD疾病中取得了良好的效果，2023年销售额超过54亿美元，这充分显示了高亲和性人源单克隆抗体在疾病治疗中的潜力。在疾病机制研究方面，高亲和性人源单克隆抗体能够作为有力的工具，通过特异性结合整合素α4β7，阻断其与配体的相互作用，从而深入研究其在疾病发生发展过程中的具体信号通路和分子机制，为开发更多有效的治疗策略提供理论基础。

1.2国内外研究现状

在整合素α4β7高亲和性人源单克隆抗体筛选方面，国内外都取得了一定的进展。国外研究起步相对较早，技术较为成熟。例如，一些研究团队利用噬菌体展示技术，构建大容量的人源抗体文库，通过多轮筛选和亲和力成熟，成功获得了高亲和性的抗整合素α4β7单克隆抗体。这种技术能够在体外模拟抗体的进化过程，快速筛选出具有高亲和力的抗体。还有研究运用酵母展示技术，将抗体片段展示在酵母细胞表面，结合流式细胞术进行筛选，提高了筛选效率和准确性。

国内在这方面的研究也在不断追赶。国内科研人员通过优化噬菌体展示技术的筛选条件，提高了筛选出高亲和性抗体的概率。一些团队还结合计算机辅助设计，对抗体的结构进行预测和优化，从而指导实验筛选，缩短了研发周期。例如，通过分析整合素α4β7的三维结构，预测与抗体结合的关键位点，有针对性地设计抗体文库，提高筛选的特异性。

在功能检测方面，国外研究已经建立了一系列完善的检测方法。利用细胞黏附实验，检测抗体对整合素α4β7与MAdCAM-1结合的阻断能力，直观地反映抗体的功能。通过流式细胞术分析抗体对淋巴细胞表面整合素α4β7表达水平的影响，以及对淋巴细胞迁移能力的影响，从细胞层面深入研究抗体的作用机制。动物模型实验也是常用的方法，将抗体应用于IBD或艾滋病动物模型，观察疾病症状的改善情况，评估抗体的治疗效果。

国内在功能检测方面也建立了相似的方法体系，并在此基础上进行了创新。在细胞黏附实验中，国内研究人员改进了实验流程，提高了实验的重复性和准确性。在动物模型实验中，国内团队建立了更加符合人类疾病特征的动物模型，如基因编辑小鼠模型，能够更准确地评估抗体在体内的功能和疗效。

1.3研究目标与内容

本研究旨在筛选出高亲和性的整合素α4β7人源单克隆抗体，并对其功能进行全面检测。具体而言，在筛选方法上，将采用噬菌体展示技术与单细胞测序技术相结合的策略。利用噬菌体展示技术构建人源抗体文库，通过多轮生物淘选，初步筛选出与整合素α4β7具有结合能力的抗体。再运用单细胞测序技术，对筛选出的抗体分泌细胞进行测序分析，获取抗体的基因序列，进一步优化抗体的亲和力和特异性。

在功能检测方面，将从多个层面展开。在分子水平上，运用表面等离子共振（SPR）技术，精确测定抗体与整合素α4β7