DB36／T 2206-2025 汉滩病毒和汉城病毒双重实时荧光RT-PCR检测方法.pdfVIP

ICS11.020DB36

CCSC62

江西省地方标准

DB36/T2206—2025

汉滩病毒和汉城病毒双重实时荧光RT-PCR

检测方法

Duplexreal-timeRT-PCRdetectionmethodforHantaanvirusandSeoulvirus

2025-12-29发布2026-07-01实施

江西省市场监督管理局发布

DB36/T2206—2025

汉滩病毒和汉城病毒双重实时荧光RT-PCR检测方法

1范围

本文件规定了汉滩病毒和汉城病毒双重实时荧光RT-PCR检测的仪器设备、试剂和材料、生物安全

要求、检测步骤和结果判定等内容。

本文件适用于啮齿类动物汉滩病毒和汉城病毒的双重实时荧光RT-PCR检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，

仅该日期对应的版本适用于本文件，不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本

文件。

GB/T6682分析实验室用水规格和试验方法

GB19489实验室生物安全通用要求

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1

汉滩病毒Hantaanvirus(HTNV)

引起肾综合征出血热的病原体之一，是一种有包膜分节段的负链RNA病毒，自然宿主主要为黑线姬

鼠。

3.2

汉城病毒Seoulvirus(SEOV)

引起肾综合征出血热的病原体之一，是一种有包膜分节段的负链RNA病毒，自然宿主主要为褐家鼠。

3.3

实时荧光RT-PCRreal-timeRT-PCR

在常规逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)的基础上，加入一条特异性探针，探针两端分别标记一个荧

光报告基团和一个荧光淬灭基团。当探针完整时，报告基团发射的荧光信号被淬灭基团吸收；在聚合酶

链式反应(PCR)过程中，Taq酶的5→3外切酶活性将探针酶切降解，使荧光报告基团和荧光淬灭基团

分离，淬灭作用消失，荧光信号产生并被检测仪器接收。利用荧光信号累积实现实时在线监测整个PCR

反应过程，结合相应的软件可以对结果进行定性和定量分析。

4缩略语

1

DB36/T2206—2025

下列缩略语适用于本文件。

RNA：核糖核酸(ribonucleicacid)

PBS：磷酸盐缓冲液(phosphatebufferedsaline)

RT-PCR：逆转录聚合酶链式反应(reversetranscription-polymerasechainreaction)

PCR：聚合酶链式反应(polymerasechainreaction)

Ct值：实时荧光RT-PCR反应中每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数(cycle

thresholdvalue)

FAM：羧基荧光素（Carboxyfluorescein）

HEX：六氯-6-甲基荧光素（Hexachlorofluorescein）

5仪器设备

5.1荧光定量PCR仪。

5.2低温高速离心机：可控温度至4℃，相对离心力可达8000g以上。

5.3组织研磨仪。

5.4生物安全柜。

5.5冰箱：普通冰箱（2℃~8℃）、超低温冰箱（-70℃~-86℃）。

5.6微量移液器：量程规格分别为0.5μL~10μL、2μL~20μL、5μL~50μL、20μL~200μL、

100μL~1000μL。

5.7压力蒸汽灭菌器。

5.8核酸提取仪。

6试剂和材料

6.1试