第7章-分批发酵、补料分批发酵与高密度发酵.pptVIP

一.分批发酵(batchfermentation)

1.分批发酵概况操作工艺

2.分批发酵中的菌体生长规律、代谢变化

3.分批发酵过程的最优化、生产率

二.补料分批发酵（Fed-batchFermentation）

1．补料分批发酵技术含义及二者区别

2．补料分批发酵技术特点和类型：

3．补料分批发酵的适用范围

4.流加物料的方式和补料分批发酵的技术评价

三高密度发酵（Highcell-densityfermentation）

1.高密度发酵的定义、生产影响因素、策略以及反应器：

2.重组大肠杆菌高密度发酵、

3.除去抑制物的方法和存在的问题;分批发酵是指生物反应器的间歇操作,在发酵过程中,除了不断进行通气(好氧发酵)和为调节发酵液的pH而加入酸碱溶液外,与外界没有其它物料交换。这种培养方式操作简单,是一种最为广泛使用的方式。分批发酵的主要特征是所有工艺变量都随时间而变化。主要的工艺变量是各种物质的浓度及其变化速率。(见下表)

;分批发酵的思考

在分批发酵中,低浓度培养基中的营养物会迅速耗尽,引起培养物过早地从指数生长期向稳定期转变。

提高底物浓度的优点与不足:

a.提高底物浓度可以延长微生物的指数生长期,从而提高发酵的容量产率和产物浓度。

b.提高底物浓度(对于某些可溶性碳源来说,微生物的Ks值多在1-10mg/L范围内,当超过10Ks或

10-100mg/L时,微生物就会以接近最大比生长速率(μmax)的速度生长)

c.过高的底物浓度会造成一系列不利影响,底物抑制,培养基粘度升高引起传质效率降低等。克服

此不足的方法就是采用Fed-Batch法(补料分批技术);1)主要设备

主培养罐(主发酵罐)和种子培养罐(种子罐),均属于深层培养装置。(含有配料,蒸气灭菌,冷却,通气,空气过虑,搅拌和消泡装置等)。种子罐:为主发酵罐培养基接种所需要的菌体种子。

摇瓶培养----种子培养----发酵培养(10倍体积逐级扩大)

2)发酵生产基本过程

种子罐高压蒸气灭菌(空消)------投入培养基再灭菌(实消)------接入从摇瓶培养得来的种子------培养。

同时,准备发酵罐------空消------连消:利用专门的灭菌装置对发酵培养基进行连续灭菌------投入空消过的发酵罐。经培养种子罐内达到一定菌体量时-----发酵罐------发酵终点------提取精制。

发酵周期:每批反应的全过程即加入灭菌的培养基,接种,培养的诱导期,反应过程,放罐,洗罐以及空罐灭菌所需要时间的总合。;2.分批发酵中的菌体生长规律

微生物的生长包含两个含义

即：细胞的生长

微生物群体数量的增加

1)典型的生长周期

分批培养是一个封闭的系统。接种后,除氧之外,一般都不向系统内添加和除去任何物质。因此,分批培养系统只能在一段时间内支持微生物的增殖。可以分为五个时期:

A延迟期

B对数生长期

C减速期

D静止期

E衰退期;①延迟期或延滞期

发酵培养基在接种后，一段时间内细胞浓度的增加不明显，该阶段为延迟期。新环境中存在某些旧环境中没有的营养物质，细胞须合成有关酶类来利用该营养物质，从而出现延迟期。许多胞内酶需要辅酶或活化剂，它们是一些小分子物质或离子，具有较大的通过细胞膜的能力。当细胞转移到新环境中，这些物质可因扩散作用而从细胞中向外流失，这是产生延迟期的又一原因。

如：产气气杆菌在葡萄糖磷酸缓冲液中的延迟期与镁离子浓度有关，当培养基中镁离子浓度较高时，细胞内镁的流失少，延迟期较短；而当培养基中镁离子浓度低时，由于镁的流失而使延迟期大大延长。

延迟期的长短与种子的菌龄及接种量的大小有关。年轻的种子产生的延迟期较短，接种量愈大，则延迟期愈短，生产实践中缩短延迟期的方法主要有：加大接种量；在新的培养基中加入上次培养基的某些成分。;如在t1时的菌体细胞浓度为X1，则在t2时的细胞浓度为：