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胺甲斑蝥素与氟桂利嗪合理配伍：对耐药癫痫大鼠脑内P-gp表达的多维度解析

一、引言

1.1研究背景与意义

癫痫是一种常见的慢性神经系统疾病，其特点是反复发作性的神经元异常放电，进而引发短暂脑功能障碍。这种疾病严重影响着患者的生活质量，给患者及其家庭带来了沉重的负担。全球范围内，癫痫的患病率约为5‰-7‰，患者数量超过5000万。在我国，癫痫患者接近1000万，年发病率约为28.8/10万，每年新增患者约38万。尽管目前癫痫的治疗仍以抗癫痫药物（AEDs）为主，但仍存在诸多问题。

耐药性是癫痫治疗面临的主要难题之一。研究表明，新诊断的癫痫患者中，有20％-30%对各种AEDs不敏感，产生耐药。即使各种新型AEDs不断问世，癫痫耐药问题依然棘手，成为目前研究的热点之一。癫痫耐药不仅使患者的发作难以控制，还会增加患者的心理负担和社会歧视，同时也加重了医疗资源的消耗。

药物耐药性的形成机制复杂多样，其中P-糖蛋白（P-glycoprotein，P-gp）的过度表达是导致癫痫耐药性的一个主要因素。P-gp是一种由细胞膜跨膜的ATP酶，属于ATP结合盒（ABC）转运蛋白超家族成员。它能够主动耗能地将多种药物泵出细胞，包括抗癫痫药物。在血脑屏障上，P-gp主要位于毛细血管近血管腔一侧和毛细血管外星形胶质细胞足突上，参与构成血脑屏障。当P-gp表达增加或活性增强时，可阻止AEDs穿过血脑屏障到达脑组织，降低AEDs在致痫灶的有效浓度，从而导致癫痫耐药。因此，减少P-gp的表达水平可能是有效减少耐药性的一个重要途径。

胺甲斑蝥素（4-Amino-2-Methyl-Cantharidinimide，AMC）是近期合成的斑蝥胺衍生物。前期研究表明，AMC能够对抗最大电休克（MES）和抗戊四唑（MET）发作，同时具有最小起效剂量低、达峰时间最快、半效期和作用持续时间长、消除较慢等特点。氟桂利嗪（Flunarizine，FLU）作为添加剂治疗癫痫，特别是难治性癫痫，国外有多家基础和临床研究报道。本研究将二者进行合理配伍，旨在探讨其对耐药癫痫大鼠脑内P-gp表达的影响，具有重要的理论意义和临床应用价值。

在理论方面，目前对于胺甲斑蝥素与氟桂利嗪配伍的研究较少，本研究有助于深入了解二者的协同作用机制，为癫痫耐药机制的研究提供新的思路和理论依据。在临床应用方面，若能找到二者的最佳配伍方案，将为癫痫患者提供更有效的治疗方法，提高患者的生活质量，减轻社会和家庭的负担。同时，也为开发新型抗癫痫药物提供了有益的参考。

1.2研究目的与内容

本研究旨在确定胺甲斑蝥素与氟桂利嗪的最佳配伍剂量比例，观察两药单用和配伍组方对青霉素慢性点燃耐丙戊酸钠大鼠惊厥模型的对抗作用，以及对耐药大鼠脑内P-糖蛋白表达的影响，并从蛋白水平探讨其抗耐药的作用机制。

具体研究内容如下：

动物模型建立：采用青霉素（PNC，3x106U?kg-1?ip）连续点燃13天的方法，建立大鼠惊厥模型。灌胃惊厥大鼠丙戊酸钠（VPA，250mg?kg-1?d）21天，建立耐药癫痫模型。通过严格的筛选标准，确保模型的成功建立。例如，以Racine分级标准和惊厥发作潜伏期作为评定指标，只有出现RacineIV-V级并连续出现6-8次以上发作的大鼠，才确定惊厥模型点燃成功；在建立耐药模型时，最后一次给药24h后应用PNC（3x106u?kg-1）进行动物筛选，若大鼠对丙戊酸钠产生耐药，则模型建立成功。

药物配伍方案拟定：在前期研究和文献调研的基础上，选择胺甲斑蝥素和氟桂利嗪两种药物进行配伍测试。设定不同的比例，如联合I（AMC：FLU=1：1）、联合II（AMC：FLU=1：4）、联合III（AMC：FLU=4：1）等，研究各种比例下的药效及耐药性下的药效差异。

分组实验与指标检测：将大鼠随机分为正常组、模型组、单药组（AMC组、FLU组）、配伍组（联合I组、联合II组、联合III组）。通过正常组和模型组区分结果的可靠性，正常组作为空白对照，模型组用于验证模型的有效性。单药组测定两种药物单独施用时的药效，配伍组测定两种药物按照不同比例配伍后的药效。采用免疫组化（SABC法）技术，检测耐药大鼠脑内P-糖蛋白的表达变化，统计分析AMC、FLU单药和不同组方对耐药大鼠脑内P-gp表达量的影响。

数据统计与分析：基于测定结果，用Excel进行数据统计，用SPSS进行数据分析和图形绘制。采用合适的统计方法，如组内比较使用两独立样本t检验，抗MES作用的抗惊率的比较采用Y检验，组间