江苏高考生物一轮复习：微难点4 PCR相关问题分析（学生卷）.pdfVIP

微瓦点4|

PCR相关问题分析

核心提炼

I.PCR的几个基础问题

l（）PCR中文名称是“聚合酶链式反应”，其最大的特点是体外大量扩增的DNA,便于后续的基因

表达载体构建或DNA电泳分析等。

2（）主要原理是DNA半保留复制和（DNA热变性），其特异性主要取决于引物设计和扩增条件控制如（

退火温度、Mg2+浓度等）。

3（）基本程序：高温变性一低温复性退（火）一中温延伸。

4（）基本反应体系为：模板一（般为提取的总DNA或总RNA）、dNTP原（料和能量）、耐高温的DNA聚

合酶、特异性引物、缓冲液含（Mg2+）等。

5（）PCR可以用如下反应式表示：

缓冲液

dNTP+模板+引物Mg2+,-/温的BNA聚含二

2DNA片段

概念辨析

PCR与细胞内DNA复制的主要区别

比较项PCR细胞内DNA复制

解旋方式高温解旋酶A（TP供能）

解旋结果模板全部解旋局部解旋

场所体外微（量离心管）细胞内如（细胞核、线粒体、叶绿体等）

耐高温的DNA聚合酶S（qDNA聚合

酶解旋酶、DNA聚合酶、DNA连接酶等

酶）

引物成分DNA短链一股为RNA短链

原料4种脱氧核昔酸脱氧核甘酸实（际为dCTP、dATP、dGTP、dTTP）

能量电加热、dNTPATP和dNTP

子链合成

两条子链均连续合成一条链连续先（导链），另一条链不连续

连续性

主要过程变性一好性f延伸解旋f引物合成f子链延伸f恢复螺旋

产物数量aX2\a为起始模板数）一个DNA复制产生2个DNA

温度条件高温一低温一中温温和条件生（物的体温）

复制起

引物复制原点2（1）

点的决定

产物的

两引物之间的长度整个DNA

长度

突变率较高较低(存在检验点和复杂的纠错机制等)

2.PCR过程模型

DNA

DNA

亦他雨匕人任变性再与合成

样品DNA

法性再与合成引物亚稀B瑟通孥」^

引物复性DNA/