沉默Twist基因对HCT116细胞株生物学行为的深度剖析：体外增殖与侵袭性的研究.docxVIP

沉默Twist基因对HCT116细胞株生物学行为的深度剖析：体外增殖与侵袭性的研究

一、引言

1.1研究背景

结肠癌作为常见的消化系统恶性肿瘤，严重威胁人类健康。据统计，其发病率在全球范围内呈上升趋势，约占全部癌症的10%。结肠癌不仅会影响患者的排便习惯和排便性状，导致腹痛、腹胀、恶心、呕吐、便血、消瘦、乏力等症状，还极易发生侵袭转移，极大降低患者的生存率，是导致患者死亡的重要原因之一。因此，深入了解结肠癌的发病机制，寻找有效的治疗靶点和策略，对于改善患者的预后具有至关重要的意义。

在肿瘤研究领域，Twist基因作为一个重要的转录因子，逐渐受到广泛关注。Twist基因在胚胎发育过程中对细胞重建和迁移起着关键的调控作用。近年来的大量研究表明，Twist基因在多种肿瘤细胞中过度表达，参与了肿瘤的多个恶性生物学行为。在肿瘤侵袭转移方面，Twist基因通过促进上皮-间质转化（EMT），使上皮细胞失去极性和细胞间连接，获得间质细胞特性，从而增强肿瘤细胞的迁移和侵袭能力。此外，Twist基因还与肿瘤的抗细胞凋亡、多药耐药性以及血管生成等过程密切相关，其过度表达往往与癌症的侵蚀性和低存活率呈正相关。

在结肠癌中，Twist基因同样发挥着重要作用。已有研究证实，Twist基因的异常表达与结肠癌细胞的侵袭转移密切相关。沉默Twist基因能够抑制结肠癌细胞的迁移和侵袭能力，为结肠癌的治疗提供了新的思路和潜在靶点。然而，目前对于Twist基因在结肠癌发生发展中的具体作用机制仍不完全清楚，尤其是沉默Twist基因对结肠癌细胞体外增殖及侵袭性的影响，还需要进一步深入研究。

HCT116细胞株作为一种常用的结肠癌细胞系，具有典型的结肠癌细胞生物学特性，是研究结肠癌发病机制和治疗靶点的重要模型。因此，探究沉默Twist基因对HCT116细胞株体外增殖及侵袭性的影响，对于揭示结肠癌的发病机制、寻找新的治疗靶点以及开发更有效的治疗策略具有重要的理论和实际意义。

1.2研究目的与意义

本研究旨在明确沉默Twist基因对HCT116细胞株体外增殖及侵袭性的影响。通过运用RNA干扰等技术沉默HCT116细胞中的Twist基因，从细胞水平观察细胞增殖和侵袭能力的变化，并深入探讨其潜在的分子机制。

从理论意义来看，本研究有助于进一步揭示Twist基因在结肠癌发生发展过程中的作用机制，丰富对结肠癌分子生物学的认识，为深入理解肿瘤的侵袭转移机制提供重要的实验依据。从实际应用价值而言，若能证实沉默Twist基因可有效抑制HCT116细胞的体外增殖及侵袭性，将为结肠癌的治疗提供新的潜在靶点，为开发基于Twist基因的靶向治疗药物和基因治疗策略奠定基础，有望为结肠癌患者带来更有效的治疗手段，改善患者的预后和生存质量。

二、材料与方法

2.1实验材料

2.1.1细胞株

本实验选用的HCT116细胞株购自美国典型培养物保藏中心（ATCC）。该细胞株源自一名患有结肠癌的男性患者，具有上皮细胞样形态，呈贴壁生长特性。HCT116细胞保留了结肠癌细胞的典型生物学特征，如具有较高的增殖活性和侵袭转移能力，且能稳定表达多种与结肠癌发生发展相关的基因和蛋白，是研究结肠癌发病机制及药物筛选等方面的常用细胞模型。

HCT116细胞的培养条件如下：使用含10%胎牛血清（FBS，Gibco公司）的McCoys5A培养基（Gibco公司），置于37℃、5%CO?的细胞培养箱中培养。每2-3天更换一次培养基，当细胞融合度达到80%-90%时，用0.25%胰蛋白酶（含0.02%EDTA，Gibco公司）进行消化传代，传代比例为1:2-1:3。传代时，先吸去旧培养基，用无菌PBS冲洗细胞2次，加入适量胰蛋白酶消化液，置于显微镜下观察，待细胞变圆且部分细胞开始脱离瓶壁时，加入含血清的培养基终止消化，轻轻吹打细胞使其分散成单细胞悬液，然后接种到新的培养瓶中继续培养。

2.1.2主要试剂与仪器

实验用到的沉默Twist基因相关试剂如下：针对Twist基因的小干扰RNA（siRNA）由广州锐博生物科技有限公司设计并合成，包括si-Twist（序列：5-CCUACUGGUGUCAAAGAUUTT-3）和阴性对照siRNA（si-NC，序列：5-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3）；转染试剂选用Lipofectamine3000（Invitrogen公司）。

细胞培养试剂除上述提及的McCoys5A培养基、胎牛血清、胰蛋白酶外，还包括青霉素-链霉素双抗溶液（100×，Gibco公司），用于防止细胞培养过程中