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生物实习报告

微生物培养与鉴定实习报告

姓名：张明

学号专业：生物科学

实习时间：2023年7月1日-2023年7月15日

实习地点：大学生物科学学院微生物实验室

摘要

本实习报告详细记录了为期两周的微生物培养与鉴定实习过程。实习内容包括微生物的纯培养技术、菌落形态观察、生理生化特性测定以及分子生物学鉴定方法。通过本次实习，共分离纯化得到15株细菌和8株真菌，对其进行了形态学观察、生理生化实验和16SrRNA/ITS序列分析。鉴定结果显示，细菌主要包括大肠杆菌(Escherichiacoli)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)等；真菌主要包括白色念珠菌(Candidaalbicans)、黑曲霉(Aspergillusniger)和青霉属(Penicilliumsp.)等。实习过程中，共完成平板划线分离42次，革兰氏染色30次，生化反应实验20项，PCR扩增18次，测序分析15份样本。本次实习不仅提高了微生物学实验操作技能，还加深了对微生物多样性和生态分布的理解。

1.前言

微生物是地球上最古老、最丰富的生命形式之一，广泛分布于自然界各种环境中。微生物学研究对于医学、农业、食品工业、环境保护等领域具有重要意义。本次实习旨在通过系统的微生物学实验操作，掌握微生物分离、纯培养、鉴定等基本技能，培养严谨的科学态度和实验操作能力。

2.实习目的

1.掌握微生物无菌操作技术和培养基制备方法

2.学习微生物分离纯化的基本原理和技术

3.熟悉微生物形态学观察和生理生化鉴定方法

4.了解分子生物学技术在微生物鉴定中的应用

5.培养科学思维能力和实验数据处理能力

3.实验材料与方法

3.1实验材料

3.1.1样本来源

-土壤样本：校园草坪表层土(0-5cm)5份

-水样：校园湖泊水样3份

-空气样本：实验室、教室、食堂空气各1份

-临床样本：模拟临床样本(由实验室提供)

3.1.2培养基

-营养琼脂培养基

-麦康凯琼脂培养基

-沙堡氏琼脂培养基

-马铃薯葡萄糖琼脂培养基

-伊红美蓝琼脂培养基

-各种生化反应培养基(包括糖发酵培养基、蛋白胨水培养基、尿素琼脂培养基等)

3.1.3试剂与仪器

-革兰氏染色液(结晶紫、碘液、95%乙醇、番红)

-生理盐水(0.85%NaCl)

-PCR试剂盒、DNA提取试剂盒

-凝胶电泳设备、PCR仪、凝胶成像系统

-高压蒸汽灭菌锅、超净工作台、恒温培养箱、显微镜

3.2实验方法

3.2.1样本采集与处理

1.土壤样本：采用五点取样法，每份样本取10g，加入90mL无菌生理盐水，震荡混匀，梯度稀释至10^-3、10^-4、10^-5。

2.水样：取100mL水样，过滤后，将滤膜贴于相应培养基上。

3.空气样本：采用沉降法，将无菌营养琼脂平板在采样点暴露15分钟。

4.临床样本：直接接种于血平板和麦康凯平板上。

3.2.2微生物分离纯化

1.平板划线法：将适当稀释度的样本液在平板上进行分区划线，37℃培养24-48小时。

2.涂布平板法：取0.1mL适当稀释度的样本液涂布于平板表面，37℃培养24-48小时。

3.2.3微生物鉴定

1.形态学观察：

-菌落形态：大小、形状、颜色、边缘、表面、透明度等

-细胞形态：革兰氏染色、芽孢染色、荚膜染色等

-显微镜观察：菌体形状、大小、排列方式等

2.生理生化实验：

-糖发酵实验：葡萄糖、乳糖、蔗糖发酵

-IMViC实验：吲哚实验、甲基红实验、VP实验、柠檬酸盐利用实验

-尿素水解实验

-氧化酶实验

-触酶实验

3.分子生物学鉴定：

-DNA提取：采用CTAB法提取微生物总DNA

-PCR扩增：16SrRNA基因(细菌)或ITS序列(真菌)扩增

-序列测定与比对：将PCR产物送测序，与GenBank数据库进行BLAST比对

4.实验结果

4.1微生物分离结果

4.1.1不同来源样本微生物数量统计

|样本类型|细菌数量(CFU/g或CFU/mL)|真菌数量