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2026年pcr性能验证考试试题

考试时长：120分钟满分：100分

试卷名称：2026年PCR性能验证考试试题

考核对象：生物技术专业学生及行业从业者

题型分值分布：

-判断题（20分）

-单选题（20分）

-多选题（20分）

-案例分析（18分）

-论述题（22分）

总分：100分

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一、判断题（每题2分，共20分）

1.PCR扩增效率越高，表明该反应体系的特异性越好。

2.在PCR反应中，引物二聚体的产生会影响扩增的特异性。

3.DNA聚合酶的热稳定性越高，PCR扩增的退火温度可以设置得越高。

4.PCR产物凝胶电泳时，若观察到多条条带，则说明反应体系存在非特异性扩增。

5.无菌操作对于PCR实验至关重要，因为污染物（如细菌DNA）会干扰结果分析。

6.PCR熔解曲线分析可用于判断产物的纯度，单一峰型代表纯度高。

7.限制性内切酶可用于PCR产物的酶切鉴定，但会破坏PCR产物。

8.PCR循环数越多，产物量越大，即使初始模板量很低也能获得可检测的信号。

9.SYBRGreenI染料法适用于实时荧光定量PCR（qPCR）检测。

10.PCR抑制剂的存在会降低PCR扩增效率，常见于临床样本中。

二、单选题（每题2分，共20分）

1.下列哪种物质是PCR反应中必需的？

A.RNA聚合酶

B.DNA聚合酶

C.转录酶

D.拓扑异构酶

2.PCR扩增的退火温度通常设置在以下哪个范围？

A.25-35℃

B.35-55℃

C.55-75℃

D.75-95℃

3.以下哪种方法可用于检测PCR产物的特异性？

A.毛细管电泳

B.熔解曲线分析

C.南非DNA印迹

D.电子显微镜观察

4.PCR抑制剂最常见于哪种样本类型？

A.血清样本

B.粪便样本

C.空气样本

D.组织样本

5.以下哪种引物设计原则是错误的？

A.引物长度为18-22bp

B.引物Tm值差异应小于5℃

C.引物内部不应存在二级结构

D.引物3端应避免G/C富集

6.PCR产物凝胶电泳时，若观察到弥散条带，则可能的原因是？

A.电泳缓冲液pH值不合适

B.DNA聚合酶活性过高

C.模板DNA浓度过高

D.引物二聚体形成

7.SYBRGreenI染料法检测PCR产物的原理是？

A.嵌入法检测双链DNA

B.探针杂交法检测单链DNA

C.荧光猝灭法检测RNA

D.化学发光法检测蛋白质

8.以下哪种试剂可用于PCR反应的pH值调节？

A.Tris-HCl

B.EDTA

C.NaCl

D.MgCl2

9.PCR循环数通常设置为多少次？

A.20-25

B.25-35

C.35-45

D.45-55

10.以下哪种方法可用于提高PCR扩增的特异性？

A.增加引物浓度

B.降低退火温度

C.使用高保真DNA聚合酶

D.延长延伸时间

三、多选题（每题2分，共20分）

1.PCR反应体系中可能存在的污染物包括？

A.细菌DNA

B.RNA

C.蛋白质

D.PCR抑制剂

2.影响PCR扩增效率的因素包括？

A.引物设计

B.DNA聚合酶活性

C.模板DNA浓度

D.循环数设置

3.PCR产物熔解曲线分析的意义在于？

A.判断产物纯度

B.检测非特异性扩增

C.定量分析产物浓度

D.鉴定基因突变

4.以下哪些是PCR抑制剂常见的来源？

A.临床样本（如血液）

B.环境样本（如土壤）

C.实验室试剂（如甘油）

D.基因库（如质粒）

5.引物设计时应避免的二级结构包括？

A.发夹结构

B.二聚体

C.三链体

D.错配碱基

6.PCR实验中常用的缓冲液成分包括