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北京油鸡α-干扰素基因克隆与表达特性及功能研究

一、引言

1.1研究背景

北京油鸡作为我国特有的优良鸡种，有着悠久的养殖历史，最早可追溯至明清时期。其肉质鲜美、营养丰富，蛋品质优良，深受消费者青睐，在市场上具备较高的经济价值。近年来，随着人们生活水平的提高和对高品质禽产品需求的增加，北京油鸡的养殖规模逐渐扩大，养殖模式也从传统散养向规模化、集约化养殖转变，已然成为部分地区农业经济的重要组成部分。

然而，在其养殖过程中，北京油鸡易受到多种病原微生物的侵害，如禽流感病毒、新城疫病毒、传染性法氏囊病病毒等。这些病原微生物不仅会导致北京油鸡生长发育受阻、产蛋量下降，严重时甚至会造成大规模死亡，给养殖户带来巨大的经济损失。以禽流感为例，高致病性禽流感一旦爆发，感染鸡群的死亡率可高达100%，即使是低致病性禽流感，也会使鸡群产蛋率下降30%-50%，同时影响鸡肉品质。新城疫病毒感染也会导致鸡群出现呼吸道症状、神经症状，发病率和死亡率均较高，严重影响北京油鸡产业的健康发展。

干扰素（Interferon，IFN）是一类由细胞产生的具有广泛生物学活性的蛋白质，是机体防御系统的重要组成部分。根据其细胞来源、生化特性及生物学活性差异，干扰素分为两大类：I类（IFN-α、IFN-β、IFN-ω和IFN-τ，又称IFN-α/β）和Ⅱ类（IFN-γ）。其中，α-干扰素主要由单核细胞产生，具有广谱抗病毒、抗肿瘤和免疫调节等多种功能。在禽类养殖中，干扰素作为一种天然的免疫调节剂，能够刺激机体免疫系统，增强鸡体对病原微生物的抵抗力，在鸡病防治中发挥着重要作用。大量研究表明，干扰素在治疗禽类肿瘤与病毒性疾病的临床应用中，有着效果好、见效快、无残留且持续时间久的特点，不管是针对于产蛋鸡、肉仔鸡或是种鸡，在鸡病防治中都可使用。例如，在治疗新城疫时，使用干扰素、抗生素与多维素综合治疗的鸡舍，死亡率明显低于使用其他治疗方法的鸡舍。

北京油鸡作为独特的地方鸡种，其α-干扰素可能具有与其他鸡种不同的生物学特性和功能。对北京油鸡α-干扰素进行克隆和表达研究，有助于深入了解其免疫机制，开发出更有效的防治北京油鸡疾病的方法，从而推动北京油鸡产业的健康发展。

1.2国内外研究现状

1994年，Sekellick等通过比较已知哺乳动物的IFN-α、IFN-β氨基酸序列，以其保守区域设计引物，首次成功克隆得到鸡IFN-α基因。研究发现，鸡IFN-α基因没有内含子，基因为多拷贝，且至少编码2类血清型明显不同的具有抗病毒活性的蛋白质，在氨基酸水平上，鸡I型IFN与哺乳动物I型IFN序列有20％-24％的同源性，编码31个氨基酸的信号肽和162个氨基酸组成的成熟蛋白。此后，国内外学者对鸡α-干扰素展开了广泛深入的研究。

在抗病毒活性方面，研究发现重组鸡IFN-α对鸡传染性支气管炎病毒、传染性法氏囊病病毒、马立克氏病病毒、新城疫病毒和H9N2亚型禽流感病毒等多种病毒都具有显著的抗病毒活性，展现出较为广谱的抗病毒作用。国内也有研究利用基因合成技术合成鸡α-干扰素全基因，并克隆入合适载体进行原核表达，通过优化表达条件，成功获得了高纯度的鸡α-干扰素蛋白。在抗病毒活性测定方面，通过体外细胞实验和动物实验，证实了鸡α-干扰素对多种鸡源病毒具有抑制作用，为鸡病的防治提供了新的思路和方法。同时，还有研究将鸡α-干扰素与疫苗联合使用，发现其能够增强疫苗的免疫效果，提高鸡体对病毒的抵抗力。

然而，针对北京油鸡α-干扰素的研究相对较少。目前，对于北京油鸡α-干扰素的基因序列、蛋白结构和功能特性等方面的了解还十分有限。在基因克隆和表达方面，尚未有系统深入的研究报道，这在一定程度上限制了对北京油鸡免疫机制的深入理解和相关疾病防治技术的开发。

1.3研究目的与意义

本研究旨在克隆和表达北京油鸡α-干扰素基因，获得具有生物学活性的重组蛋白，并对其功能进行初步分析，为北京油鸡疾病的防治提供理论基础和技术支持。具体而言，通过克隆北京油鸡α-干扰素基因，明确其基因序列特征，为后续的基因功能研究和分子生物学操作提供基础；利用原核表达系统表达重组α-干扰素蛋白，并对其进行纯化，获得高纯度的目的蛋白，为开展功能研究提供物质保障；通过体外实验，测定重组α-干扰素的抗病毒活性、抑菌活性以及调节细胞增长等功能，深入了解北京油鸡α-干扰素的生物学特性和作用机制。

本研究具有重要的理论意义和实际应用价值。在理论方面，有助于丰富对北京油鸡免疫系统的认识，填补北京油鸡α-干扰素研究领域的空白，进一步完善禽类干扰素的研究体系。在实际应用方面，为开发针对北京油鸡疾病的新型防治药物和方法提供科学依