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【收藏】微生物实验室的菌种鉴定小结

食品微生物检测

微生物检验过程中检出的微生物应该进行微生物鉴定，虽然典里

明确了鉴定到什么水平的标准和一些基础内容操作方法。但是因为实

验室能力有限，很多实验室要么消极抵抗要么稀里糊涂的要么完全委外。

其实我们一般微生物实验室自己还是可以做一些工作，特别是细菌

的鉴定。再就是菌种鉴定时，不是直接拿来就鉴定，需要一些预先做一

些处理或判断。现将一些基础知识进行总结如下：

、相关定义

L生理生化鉴定：根据微生物对各种生理条件（温度、pH、氧气、

渗透压人生化指标（唯一氮源、抗生素、酶、盐碱性）代谢反应

进行分析,并将结果转化成软件可以识别的数据,进行聚类分析,与已知

的参比菌株数据库进行比较,最终对未知菌进行鉴定的一种技术。

2.革兰氏染色：系细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，染色后细

菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结

构特征,而用以分类鉴定。

3.平板划线法：系指把杂菌样品通过在平板表面划线稀释而获得单

菌落的方法。

4.氧化酶试验：氧化酶不直接与氧化酶试剂起反应，而是先使细胞

色素C氧化，然后此氧化型细胞色素C再使对苯二胺氧化，产生颜色反

应而进行的试验，用于区分不发酵的革兰阴性杆菌（氧化酶阳性）和肠

道菌（氧化醐阴性）。

5、触酶试验：大多需氧和兼性厌氧菌均产生过氧化氢酶，但链球

菌属阳性，故常用此试验来鉴定，用于区分葡萄球菌（过氧化氢酶阳性）

和链球菌（过氧化氢醐阳性）。

6.凝固酶试验：用于区分凝固酶阴性葡萄球菌（可推测为非致病

性）和凝固酶阳性葡萄球菌（很可能为致病性）。

二.工作程序

1.微生物鉴定程序

微生物鉴定的基本程序包括分离纯化和鉴定，鉴定时一般先将待检

菌进行初步的分类。鉴定的方法有表型微生物鉴定和基因型微生物鉴

定，根据所需要达到的鉴定水平选择鉴定方法。目前实验室室进行表型

微生物鉴定后可以用API试剂条进行或其他等效的试剂条进行菌种鉴

定,如API试剂条鉴定不能满足要求时采取委外鉴定。

注：为了控制成本,可以自己进行鉴定,不具备能力时再委外。API

鉴定用的试剂条的效期有限,需要注意效期或跟供应商做好沟通备货。

1.1待检菌的分离与纯化

微生物鉴定的第一步是待检培养物的分离纯化，最常用的分离纯化

方法是挑去待检菌的纯培养物（单个菌落），必要时可进一步进行纯培

养，为表型鉴定和随后的鉴定程序提供足够量的菌体。从物原材料、

制用水、生产环境、中间产品和最终产品的样品中检出的受损微生

物，经分离纯化程序使其由不利生存易产生变化的状态变为在营养富集

和最佳培养温度条件下生存的稳定状态，以保证鉴定结果的准确性具

体详见表lo

表1待检菌的分离与纯化明细表

菌种来源分离纯化步骤时培养基选择及培养条件-

L接种至对应培养基，分别在对应条件下进行培养，名垂盐流体培养基在

30~35。（：条件下培养3天，胰酪大豆翻体培养在202・5℃条件下培养5天。

2.接种两块胰酪大豆矮琼脂培养基遥，在30~35（条件下分别在有氧条件和

无童产查厌氟条件下培养18』小时..

3.如受质微生物苛养接种至哥伦比亚血琼脂平板培养基35~3FC条件下分别在

有氧条件和厌氧条件下培养回24,

1.接种至对应的胰酪大豆陈琼脂培养基在3M35P条件下培养18-24小时或沙

非无产麻氏葡萄糖麻旨培养基在20~25条件下培养2Z84W,若为霉菌应培养直至

生物限度检查：产生抱子。.

2.如转斐种不能成功转接至巧克力琼脂培养