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探索BDL诱导幼鼠胆道闭锁中肝脏纤维化生物分子的时序性演变

一、引言

1.1研究背景

胆道闭锁（BiliaryAtresia，BA）是一种严重威胁婴儿健康的肝脏疾病，主要特征为肝内外胆管进行性的炎症、梗阻与纤维化，最终导致胆管消失。作为婴儿期肝内外胆管阻塞的最常见原因，胆道闭锁的发病率虽存在一定的地域和种族差异，但总体约为1/5000-1/18000活产婴儿。在亚洲地区，如中国、日本和韩国，发病率相对较高，可达1/5000-1/10000。

早期症状主要表现为持续性黄疸、陶土样大便和浓茶样尿。若不及时治疗，胆汁无法正常排出，会引发胆汁淤积，进而严重损害肝功能，导致肝硬化、肝功能衰竭等严重并发症。据统计，未经有效治疗的胆道闭锁患儿，大多在1-2岁内死亡。即便接受了葛西手术（Kasaioperation）等胆道重建手术，仍有80%左右的患儿最终因肝脏病变进展而需要进行肝移植。这不仅给患儿家庭带来沉重的经济负担和精神压力，也对社会医疗资源造成了较大的消耗。因此，深入研究胆道闭锁的发病机制，寻找有效的治疗靶点和早期诊断指标，对于改善患儿的预后具有至关重要的意义。

目前，研究人员主要通过建立动物模型来深入探究胆道闭锁的发病机制。在众多动物模型中，胆管结扎（BileDuctLigation，BDL）诱导幼鼠胆道闭锁模型因其与人类胆道闭锁在病理生理过程上具有一定的相似性，而被广泛应用。通过对幼鼠进行胆总管结扎手术，能够模拟人类胆道闭锁导致的胆汁排泄受阻，进而引发肝脏的一系列病理变化，包括胆汁淤积、炎症反应和纤维化等。这一模型为研究胆道闭锁的发病机制提供了重要的实验基础，有助于深入了解肝脏在胆道闭锁过程中的病理生理变化，以及相关生物分子的作用机制，为开发新的治疗方法和药物提供理论依据。

1.2研究目的与意义

本研究旨在通过建立胆管结扎（BDL）诱导的幼鼠胆道闭锁模型，深入探究肝脏纤维化相关生物分子在不同时间点的表达变化规律，明确这些生物分子在疾病发展进程中的作用机制。具体而言，通过对炎症相关因子、纤维化早期指标、胆管上皮细胞特异性细胞因子、纤维化指标等mRNA表达水平的检测，揭示它们在胆道闭锁后肝脏纤维化过程中的时序性变化特征。

这一研究具有重要的理论和实践意义。从理论层面来看，有助于深入理解胆道闭锁引发肝脏纤维化的分子机制，填补该领域在生物分子时序性变化研究方面的空白，为进一步完善胆道闭锁的发病机制理论提供依据。从实践应用角度出发，明确与肝脏纤维化密切相关的生物分子及其变化规律，能够为临床早期诊断胆道闭锁提供更为精准、有效的生物标志物，实现疾病的早发现、早治疗。这些生物分子还有望成为潜在的治疗靶点，为开发新的治疗药物和方法提供方向，从而提高胆道闭锁的治疗效果，降低患儿肝移植的需求，改善患儿的生存质量和预后，减轻家庭和社会的负担。

二、实验材料与方法

2.1实验动物及分组

本研究选用100只3周龄的Wistar大白鼠幼鼠作为实验对象，其体重范围在30-40g，所有幼鼠均健康且无明显畸形。Wistar大白鼠因其具有生长发育快、繁殖力强、性情温顺、对实验条件反应较为一致等优点，被广泛应用于各类生物学研究，尤其在肝脏相关疾病模型构建中表现出良好的适用性。在本实验中，选择3周龄的幼鼠，此时幼鼠的各项生理机能正处于快速发展阶段，肝脏对胆管结扎所造成的损伤反应较为敏感，能够更明显地呈现出肝脏纤维化相关生物分子的时序性变化，有利于实验结果的观察与分析。

将这100只幼鼠随机平均分成两组，每组50只。其中一组实施BDL术（近肝门端胆总管双重结扎，结扎线之间离断），作为实验组；另一组实施假手术（开腹游离胆总管不结扎），作为对照组。随机分组的方式能够有效避免因个体差异导致的实验误差，使两组幼鼠在初始状态下尽可能保持一致，从而确保实验结果的可靠性和准确性。实验组接受胆管结扎手术，模拟人类胆道闭锁导致的胆汁排泄受阻情况，引发肝脏的一系列病理变化，如胆汁淤积、炎症反应和纤维化等；对照组进行假手术，除了不结扎胆总管外，其他手术操作与实验组相同，这样可以排除手术创伤等非实验因素对实验结果的影响。术后，两组幼鼠均在相同条件下饲养，饲养环境保持温度在22-25℃，相对湿度在50%-60%，12小时光照/12小时黑暗的昼夜节律，自由进食和饮水。良好且一致的饲养条件有助于维持幼鼠的生理状态稳定，保证实验过程中外部因素对幼鼠的影响最小化，为后续实验结果的准确性提供保障。

2.2动物模型建立（BDL术）

在进行BDL术时，首先使用3%戊巴比妥钠溶液，按照1mL/kg的剂量对幼鼠进行腹腔注射麻醉。待幼鼠进入麻醉状态后，将其仰卧