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缺血性卒中无复流动物模型建立和多维度评价方案

摘要

目的

建立脑无复流模型并对灌注减低进行多维度评价。

方法

利用激光散斑对比成像和双光子活体成像，比较C57BL/6C77=16）

和BALB/c小鼠（〃=37）短暂性大脑中动脉闭塞，以及BALB/c小鼠缺

血lh或1.5h灌注改变情况。结合激光散斑对比成像、低倍率和较高

放大倍率的灌注脑片图像，以及双光子显微镜监测红细胞流速和流量

对短暂性大脑中动脉闭塞后脑灌注下降进行活体动态以及全脑切片

和微血的评估。用微相关蛋白2染色和行为学评分评估梗死面积

和行为学缺损。

结果

在C57BL/6小鼠中，大脑中动脉区域大多数毛细血在缺血期间

仍然流动，而在BALB/c小鼠中，大多数毛细血被阻断。此外,BALB/c

小鼠缺血1.5h后，24h后再通时的皮质灌注减少至基线76.1%（与

BALB/csham组89.0%相比减少,Q0.046）,而缺血1h减少至79.9%,

与BALB/csham组无明显差异（Q0.299）。切片全脑灌注评估BALB/c

小鼠短暂性大脑中动脉闭塞1.5h导致全脑灌注减少至75.1%（与

BALB/csham组100%相比降低，^0.001）,双光子活体成像评估大

脑中动脉流域皮质表面毛细血血流在再通24h,红细胞流速降至基

线水平的50.3%（与BALB/csham组110.7%相比降低，D0.010）,

红细胞流量降至基线水平的38.9%（与BALB/csham组119.2%相比降

低，Q0.010）；高倍率切片成像评估毛细血有灌注长度为241um

±335（与BALB/csham组997um±103um相比减少，Q0.001）,

有灌注的毛细血占据的总体积分数为0.0128±0.0018（与BALB/c

sham组0.0539±0.0055相比减少，A0.001）。微相关蛋白2染

色提示BALB/c小鼠短暂性大脑中动脉闭塞1.5h导致梗死面积占全

脑面积约36%,行为学评分提示行为学缺损，评分升高至9分。

结论

BALB/c小鼠短暂性缺血1.5h导致明显的脑灌注下降以及毛细

血无复流，适合建立无复流模型。激光散斑对比成像、低倍率和较

高放大倍率的灌注脑片图像，以及双光子显微镜活体成像的结合，可

以对灌注变化进行多维度评价。

关键词：脑缺血；无复流现象；无复流模型建立；脑血流灌注;

无复流多维度评价

血再通是急性缺血性脑卒中治疗的一个重要手段『气然而，

约有一半的患者无法通过血再通治疗获得良好神经功能预后⑶，称

为无效再通。约有1/4的患者不能成功再灌注⑷。除责任血再闭塞

外，微血循环障碍导致的无复流而不能获得再灌注是主要的病理变

化⑸。无复流机制尚不清楚，还需进一步的研究。既往研究中建立和

评估脑无复流模型的方法各不相同[6-8],所用小鼠品系及造模方式和

缺血时间各有不同，没有公认的方法。本研究目的是为了建立合适的

脑无复流模型并对灌注减低进行多维度评价。

（olarbio,L038）和0.3%TritonX-100的0.1mol/LPB中在室

温下封闭1ho然后一抗4°C下孵育过夜，用PB/TritonX-100洗涤

后,将切片与二抗在室温下孵育1h。二抗是山羊抗兔AlexaFlour488

（1:500；ThermoFishercientific,A-11008）。用PB/Triton

X-100清洗后，用抗荧光衰减封片剂（olarbio,2100）封片。通

过激光共聚焦显微镜（LM710；Zeiss,德国）获得用于血分析的

Z-堆图。MAP?染色的图像用VectraPolaris

（PerkinElmer,pokane,WA,Unitedtates）进行扫描。

1.2.5梗死面积的量化从前囱层面开始每隔7张脑片选取一张30

Um厚切片用于评估梗死面积，使用ImageJ（1.53t版，美国NIH）

计算MAR阴性和全脑的面积。用梗死面积：全脑面积，得到梗死面积

与全脑的占比。

1.2.6颅窗手术用颅骨钻在运动感觉皮质上方做一个直径3mm

颅骨窗（右侧,距Bregma点-