人源双歧杆菌的分离鉴定及耐氧驯化：方法、机制与应用探索.docxVIP

人源双歧杆菌的分离鉴定及耐氧驯化：方法、机制与应用探索

一、引言

1.1双歧杆菌的概述

双歧杆菌（Bifidobacterium）作为人体肠道菌群中的关键有益菌，在维持人体健康方面发挥着不可替代的作用，被广泛认为是人体健康的重要标志之一。自1899年被发现以来，双歧杆菌便成为了微生物学和医学领域的研究热点。该菌属革兰氏阳性、厌氧、不运动、无芽孢、形态多变的杆菌，其染色不规则，过氧化氢酶呈阴性，菌落光滑，凸圆边缘完整，乳脂呈白色，闪光并有柔软质地。葡萄糖代谢属异型发酵，具有磷酸转酮酶活性，可将2mol葡萄糖酵解为3mol乙酸和2mol乳酸。其最适生存温度为37-42℃，最适pH值6.5-7.0。

双歧杆菌在人体肠道内广泛分布，尤其是在婴儿肠道中，双歧杆菌更是占据了优势地位。研究表明，以母乳喂养的婴儿在2-3天后双歧杆菌迅速增殖并成为优势菌种，5天后占菌群的95%以上，而非母乳喂养婴儿则仅占61%。随着年龄的增长和人体生理机能的变化，双歧杆菌逐渐随粪便排出，自然减少。一般健康青年人肠道内双歧杆菌占14.8%，而中老年人仅占3.2%，甚至多数老年人肠道中已无双歧杆菌存在。此外，双歧杆菌还存在于人类阴道和口腔等部位。

双歧杆菌对人体健康的重要作用是多方面的。首先，它能够维护肠道生态平衡，通过产生大量醋酸和乳酸，降低肠道pH和Eh，使肠道酸化，阻止致病菌增殖。同时，双歧杆菌还能增加肠蠕动，加快致病菌排出，从而有效预防肠道感染和肠道疾病。其次，双歧杆菌具有免疫增强作用，能够刺激肠道黏膜免疫系统，增强肠道屏障功能，提高人体对感染的抵抗力。研究表明，双歧杆菌可以提高机体吞噬细胞的活性，增强机体的免疫应答能力。此外，双歧杆菌还参与食物的消化与营养物质的吸收，能够合成多种维生素和生物酶，如维生素B1、B2、B6、B12和叶酸等，为人体提供必要的营养元素。双歧杆菌还可以调节肠道内的pH值，维持肠道内的酸碱平衡，促进肠道蠕动，改善便秘和腹泻等问题，维护肠道健康。

1.2研究目的和意义

本研究旨在从健康人群粪便中分离、鉴定人源双歧杆菌，并对其进行耐氧驯化研究，为开发新型益生菌产品提供优质菌株资源，同时也为双歧杆菌的基础研究和应用开发提供理论支持和技术参考。

在基础研究方面，双歧杆菌作为人体肠道菌群中的重要成员，其生理功能和作用机制一直是微生物学和医学领域的研究热点。然而，目前对于双歧杆菌的研究仍存在许多不足之处，如不同种类的双歧杆菌菌株的作用差异仍需进一步探讨，双歧杆菌与其他益生菌或益生元的相互作用也有待深入研究。本研究通过分离、鉴定人源双歧杆菌，并对其进行耐氧驯化研究，有助于深入了解双歧杆菌的生物学特性、生理功能和作用机制，为双歧杆菌的基础研究提供新的思路和方法。

在实际应用方面，双歧杆菌作为一种重要的益生菌，已被广泛应用于食品、保健品和医药等领域。然而，目前市场上的双歧杆菌产品存在着菌株来源不明、活性低、稳定性差等问题，严重影响了双歧杆菌产品的质量和效果。本研究通过分离、鉴定人源双歧杆菌，并对其进行耐氧驯化研究，筛选出具有优良特性的双歧杆菌菌株，为开发新型益生菌产品提供优质菌株资源，有助于提高双歧杆菌产品的质量和效果，满足人们对健康产品的需求。此外，耐氧驯化后的双歧杆菌菌株还可以在有氧条件下进行培养和生产，降低生产成本，提高生产效率，具有重要的经济价值。

1.3研究现状

人源双歧杆菌的分离与鉴定研究取得了一定的进展。传统的分离方法主要是利用选择性培养基，在厌氧条件下从人体粪便等样品中分离双歧杆菌。例如，改良的乳酸细菌（MRS）培养基常被用于双歧杆菌的分离筛选，在添加有5-溴-4-氯-3-吲哚-β-D-半乳糖苷（X-Gal）的MRS培养基上，双歧杆菌的菌落呈典型的乳白色并带有蓝色，其他菌株的菌落呈白色或深蓝色，从而可显著提高筛选效率。生理生化试验也是鉴定双歧杆菌的常用方法之一，通过检测菌种对单糖、二糖、多糖以及糖苷和糖醇类等碳水化合物的利用情况，以及对过氧化氢酶、脲酶等酶类的活性检测，来鉴定双歧杆菌。然而，单纯依靠生理生化鉴定易造成双歧杆菌鉴定结果的不准确。随着分子生物学技术的飞速发展，以PCR为基础的各种分子生物学技术逐渐应用到双歧杆菌的鉴定中。如16SrDNA序列分析技术，通过对双歧杆菌16SrDNA序列的测定和分析，与已知双歧杆菌的序列进行比对，从而准确鉴定双歧杆菌的种类。Matsuki等利用16SrRNA序列分析快速鉴定了人肠道中的46株双歧杆菌；Yeung等利用16SrDNA序列分析对市售奶粉中的双歧杆菌进行了鉴定。

关于双歧杆菌耐氧驯化的研究也有诸多报道。