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百菌清降解菌株的分离、鉴定及土壤修复效能探究

一、引言

1.1研究背景与意义

百菌清（Chlorothalonil），化学名称为2,4,5,6-四氯-1,3-苯二腈，作为一种高效、低毒、广谱型的有机氯杀菌剂，在农业生产中发挥着关键作用。自1966年首次注册并应用于草坪，随后其使用范围不断扩大，广泛用于粮食作物、蔬菜、水果、观赏植物等多种作物的真菌性病害防治，如番茄链格孢属叶枯病和果实腐烂、番茄晚疫病、芦笋紫斑病等。据相关研究统计，全球百菌清市场在过去几十年间呈现稳步增长态势，2012-2017年，全球百菌清市场总销售额从18481万美元增加到35866万美元，预计到2022年，市场价值可达47974万美元。在中国，百菌清的使用也极为普遍，其生产和销售规模庞大，是保障农作物产量和质量的重要农资之一。

然而，随着百菌清的长期大量使用，其带来的环境问题日益凸显。百菌清属于持久性有机污染物，在土壤中难以降解，具有较长的半衰期。研究表明，百菌清在土壤中的残留时间可达数月甚至数年之久。长期残留的百菌清会对土壤生态系统造成严重破坏，影响土壤微生物的群落结构和功能，抑制土壤中有益微生物的生长繁殖，如固氮菌、解磷菌等，从而降低土壤肥力和土壤的自净能力。同时，百菌清及其代谢产物可能会通过食物链的传递和富集，对人体健康产生潜在威胁。有研究发现，长期摄入含有百菌清残留的农产品，可能会对人体的免疫系统、神经系统和内分泌系统等造成损害。此外，百菌清对水生生物具有高毒性，对鱼类和水生无脊椎动物的生存和繁殖产生不利影响，威胁水生态系统的平衡。哥斯达黎加于2023年正式禁用百菌清，其主要原因就是百菌清在环境中的持久性及其所带来的负面影响，包括对健康和环境的危害以及对地下水的污染问题。

针对百菌清污染问题，微生物降解被认为是一种绿色、高效且环境友好的修复方法。从环境中分离鉴定出能够高效降解百菌清的菌株，对于深入了解百菌清的降解机制，开发有效的生物修复技术具有重要的理论意义。通过微生物的代谢作用，将百菌清转化为无害或低毒的物质，不仅可以减少百菌清在土壤中的残留，降低其对环境和人体的危害，还可以为解决其他有机氯农药污染问题提供参考和借鉴。在实际应用方面，利用筛选得到的降解菌株对受百菌清污染的土壤进行修复，能够恢复土壤的生态功能，保障农产品的质量安全，促进农业的可持续发展，具有显著的经济效益和社会效益。因此，开展百菌清降解菌株的分离鉴定及其对土壤中百菌清污染的修复研究具有重要的必要性和迫切性。

1.2国内外研究现状

在百菌清降解菌株的分离鉴定方面，国内外学者已取得了一定的成果。任晓洁等从长期被百菌清污染的土壤中收集大量样本，成功分离到14种能够明显降解百菌清的细菌，根据菌株形态和rDNA同源性分析，将它们分为假单胞菌属（Pseudomonassp.）、无色杆菌属（Achromobactersp.）、苍白杆菌属（Ochrobactrumsp.）、青枯菌属（Ralstoniasp.）和溶杆菌属（Lysobactersp.），其中溶杆菌属是新发现的具有百菌清降解能力的功能菌属，扩大了已知的百菌清降解菌的菌属范围。谷晓明等采用未有百菌清用药史的土壤定向培养49d，分离出50株百菌清耐受菌株，经初筛、复筛后得到1株降解能力最强的细菌BJQ2，经形态学、生理生化试验、16SrDNA序列同源性比对及系统发育树的分析，初步确定为阴沟肠杆菌（Enterobactercloacae）。

对于百菌清的降解机制，研究发现主要包括水解、羟基化、脱氯等反应途径。如菌株TP-D1通过氰基水合作用和羟基化作用两种途径降解百菌清，产生1,3-二酰胺-四氯苯和4-羟基-三氯苯二腈（TPN-OH）等降解产物。但目前对于百菌清降解过程中关键酶和基因的研究还相对较少，降解机制尚未完全明确。

在百菌清污染土壤的修复方面，微生物修复技术因其具有成本低、环境友好等优点而受到广泛关注。王光利等从污染土壤中分离得到一株假单胞菌（Pseudomonassp．）菌株CTN-3，该菌在添加量为106CFU?g-1，温度15～30℃，pH5.8～8.3条件下，能够有效降解土壤中浓度为10～200mg?kg-1的百菌清。曾佳佳等从长期施用百菌清的土壤中筛选分离得到一株能以百菌清为唯一碳源生长并且能够降解百菌清的葡萄球菌属菌株，在百菌清浓度为500mg/L，接种量3%，温度37℃，pH值为7.0的条件下培养72h，降解率达到76.54%。然而，目前微生物修复技术在实际应用中仍面临一些挑战，如降解菌株的生长适应性、降解效率的稳定性以及与土壤环境的兼容