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基于matK和ITS序列剖析叶籽银杏的系统发育关系

一、引言

1.1研究背景与意义

银杏（GinkgobilobaL.）作为世界上现存最古老的种子植物之一，是第四纪冰川之后唯一在中国保存下来的孑遗物种，在植物演化历程中占据着独特且关键的位置。其历史可追溯至近2.8亿年以前的石炭纪，在中生代一度极为繁盛，当时的银杏类植物至少有20余属150余种，仅在我国发现的就有10多个属100多个种。然而，经漫长的演化，至上新世以后仅存银杏（GinkgobilobaL.）这一个种。尽管现代银杏为单科单属单种植物，但在其演化进程中，通过天然杂交和人工选择，种子和叶片发生了明显的形态变异，叶籽银杏便是其中极为特殊的种质。

1891年，叶籽银杏被发现，其独特之处在于植株上部分或少数叶子能结籽，最多时能占全树20%的叶片，且结籽情况不稳定，时多时少甚至有的年份不结。叶籽银杏树不仅短枝上有正常胚珠，叶子上还存在“叶胚珠”，这些叶胚珠种核较小且不整齐，虽无商品利用价值，却蕴含着重要的科研信息。从形态上看，叶胚珠通常单个或两个并列着生于褶曲的畸形叶缘上。目前，中国和日本共报道叶籽银杏47株，其树龄36-1200年不等，叶生种子发生率为5%-25%。

叶籽银杏具有多方面的重要价值。在药用领域，银杏的叶片含有丰富的银杏酚类化合物、黄酮类化合物和银杏内酯等活性成分，具有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、抗炎等多种生理活性，广泛用于预防和治疗心脑血管疾病、神经系统疾病、肿瘤等方面。叶籽银杏作为银杏的特殊类型，其药用成分及功效的研究，有望为相关疾病的治疗和预防提供新的思路和方法。在观赏价值上，其独特的叶生种子形态，使其区别于普通银杏，为园林景观增添了独特的观赏元素，满足了人们对新奇植物景观的需求。

在科研价值方面，叶籽银杏的研究有助于揭示银杏各器官的形态学本质，尤其是雌性生殖器官的形态学本质。通过对叶籽银杏个体发育的研究，能够帮助我们正确认识银杏的系统发育，探究银杏的起源、演化和亲缘关系等。例如，有研究认为银杏的可育短枝整体上相当于松柏类的一个雌球果（大孢子叶球），叶籽银杏可能与种子蕨和苏铁类等有较近的亲缘关系。然而，目前关于叶籽银杏的研究主要集中在形态的简单观察和描述，对其遗传资源研究和系统发育关系研究还比较薄弱，国内外学者对叶籽银杏的分类地位及系统进化尚无定论。

随着分子生物学技术的迅猛发展，为叶籽银杏的深入研究提供了新的有力手段。matK和ITS序列分析在植物系统发育研究中展现出重要价值。matK基因位于叶绿体基因组中，主要参与叶绿体光合作用过程。其序列变异率较低，但对物种间的差异敏感，可用于物种分类的鉴定和系统发育的研究。已有学者通过matK序列对东亚和美洲叶籽银杏进行系统发育关系分析，发现其具有高度的遗传多样性和遗传结构多样性，且美洲叶籽银杏与东亚地区的群体遗传距离较大。ITS序列（InternalTranscribedSpacer）是核糖体RNA基因间的转录间隔，变异率较高，不同物种间的ITS序列差异明显，被广泛用于物种间和属内类群间的系统发育研究。曾有学者通过ITS序列对21个叶籽银杏品种进行PCR扩增，检测到不同的ITS长度变异，并通过聚类分析和遗传分析，确认了品种间的遗传关系和遗传多样性水平。

本研究通过对叶籽银杏matK和ITS序列进行分析，并构建系统发育树，旨在深入探究叶籽银杏的遗传变异机制，明确其在植物系统发育中的地位，揭示其与其他相关植物物种的亲缘关系。这不仅能够丰富和完善银杏遗传资源信息库，为银杏的遗传资源保护、种质资源利用和品种选育提供重要依据和参考，还能进一步推动对植物进化历程的理解，为生物多样性保护和植物资源可持续利用提供理论支持。

1.2叶籽银杏研究现状

叶籽银杏作为银杏家族中的特殊种质，在形态、分布和应用等方面已取得了一定的研究成果。在形态学研究上，李士美等人运用植物制片技术、植物染色体分析技术等对叶籽银杏的叶生胚珠形态发生过程进行了深入研究。研究发现，叶籽银杏的叶片可分化为正常叶片和叶生胚珠叶叶片两种类型。正常叶片网结脉的发生率为14.6%，可细分为闭合型、Y型、V型和双V型四种类型。而叶生胚珠叶根据叶生胚珠产生的位置和弧的数量，又能划分为单弧型、双弧型和多弧型三种类型。同时，叶籽银杏树还存在黄绿相间的斑叶，其叶片气孔器为单环式，上下表皮均有气孔分布，且有双气孔和三气孔分布。在对正常叶和叶生胚珠叶的比较中，发现它们在叶片长、叶片宽、叶鲜重、叶面积等指标上存在显著差异。

从解剖学层面来看，正常叶片叶肉有栅栏组织和海绵组织的分化，而叶生胚珠叶