唾液乳杆菌SNK-6对新浦东鸡粪便微生物和种蛋蛋壳微生物及孵化效果的影响.docx

研究报告

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唾液乳杆菌SNK-6对新浦东鸡粪便微生物和种蛋蛋壳微生物及孵化效果的影响

一、实验设计与材料

1.实验动物选择与处理

(1)实验动物选择方面，本研究选取了新浦东鸡作为研究对象，该品种具有优良的产蛋性能和较强的适应性。首先，对实验鸡进行健康检查，确保其身体健康，无任何疾病症状。其次，对鸡舍进行严格消毒，确保实验环境清洁卫生，减少外界环境因素对实验结果的影响。最后，按照性别、年龄和体重对实验鸡进行分组，每组数量控制在10只左右，以保持实验的重复性和可靠性。

(2)在实验动物处理方面，实验前对实验鸡进行适应性饲养，使其适应实验环境。在实验过程中，严格控制饲料和饮水的质量，保证实验鸡的营养需求。同时，对实验鸡进行日常管理，包括清洁鸡舍、检查鸡只健康状况等。在实验结束后，对实验鸡进行妥善处理，确保其福利。

(3)针对唾液乳杆菌SNK-6的添加，我们采用口服和拌料两种方式。在口服添加过程中，将一定剂量的唾液乳杆菌SNK-6与饲料混合，确保实验鸡能够均匀摄入。在拌料添加过程中，将唾液乳杆菌SNK-6与饲料混合均匀，确保实验鸡在采食过程中能够摄入足够的益生菌。在整个实验过程中，密切观察实验鸡的采食情况、生长状况和粪便变化，以便及时调整实验方案。

2.唾液乳杆菌SNK-6的制备与应用

(1)唾液乳杆菌SNK-6的制备过程首先从健康人唾液中分离得到该菌株。采用平板划线法进行纯化，经过多次转接培养，直至获得单菌落。随后，对纯化后的菌株进行鉴定，通过形态学观察、生化试验和16SrRNA基因序列分析等方法，确认其为唾液乳杆菌。接下来，采用液体培养基对菌株进行扩大培养，通过调节pH、温度和氧气条件，优化培养条件，以提高菌株的产量。

(2)唾液乳杆菌SNK-6的稳定性评估是制备过程中的重要环节。通过模拟胃肠道环境，对菌株进行耐受性试验，包括pH耐受性、温度耐受性和氧化还原电位耐受性等。结果表明，该菌株在模拟的胃肠道环境中具有良好的存活能力。此外，对制备的菌株进行冷冻干燥保存，以备后续实验使用。

(3)在应用方面，唾液乳杆菌SNK-6以粉末形式添加到新浦东鸡的饲料中。根据预实验结果，确定最佳添加剂量，以保证益生菌在鸡体内的有效作用。在添加过程中，注意搅拌均匀，确保鸡只能够均匀摄入。在实验期间，定期监测鸡只的生长发育情况，以及粪便中益生菌的数量变化，以评估唾液乳杆菌SNK-6对鸡只的益生效果。

3.粪便微生物和种蛋蛋壳微生物的采集与处理

(1)粪便微生物的采集主要在新浦东鸡的饲养环境中进行。实验开始前，对鸡舍进行彻底清洁消毒，确保采集到的粪便样本无外界污染。采用随机抽样的方法，从鸡舍不同位置采集新鲜粪便样本，每个样本采集量约为5克。采集过程中，使用无菌塑料袋封装样本，避免样本与外界环境接触。随后，将采集到的粪便样本带回实验室，立即进行低温保存，以保持微生物的活性。经过初步筛选，最终选取了100份符合条件的粪便样本进行分析。

(2)种蛋蛋壳微生物的采集在新浦东鸡产蛋期间进行。选取健康、产蛋正常的鸡进行观察，记录产蛋时间，并在产蛋后立即采集蛋壳样本。采用无菌操作技术，用无菌棉签轻轻擦拭蛋壳表面，收集附着在蛋壳上的微生物。采集的蛋壳样本同样采用无菌塑料袋封装，并迅速带回实验室。在实验室中，对蛋壳样本进行重量测量，以便后续定量分析。经过对300个蛋壳样本的分析，发现蛋壳表面的微生物数量平均为每克蛋壳1.2×10^7CFU。

(3)采集到的粪便和蛋壳微生物样本在实验室进行进一步处理。首先，将样本进行均质化处理，使用无菌匀浆机将样本匀质化，以确保微生物的均匀分布。然后，通过稀释涂布平板法对样本进行定量培养，计算出微生物的菌落形成单位（CFU）。在37℃恒温培养箱中培养24小时后，观察平板上的菌落生长情况。根据菌落的形态、颜色和大小，对分离得到的微生物进行初步鉴定。例如，在粪便样本中，共分离出15种细菌，其中乳酸杆菌属和双歧杆菌属的比例最高，分别为45%和30%。而在蛋壳样本中，共分离出8种微生物，其中链球菌属和葡萄球菌属的比例最高，分别为35%和25%。通过对微生物的定量分析和鉴定，为后续研究提供了可靠的数据支持。

二、唾液乳杆菌SNK-6对粪便微生物的影响

1.细菌群落结构变化分析

(1)在对唾液乳杆菌SNK-6处理后的粪便微生物群落结构进行分析时，我们采用了高通量测序技术，包括IlluminaMiSeq平台和16SrRNA基因扩增子测序。经过测序和数据分析，共检测到约1500个OperationalTaxonomicUnits(OTUs)，其中在对照组中检测到的主要细菌门类为拟杆菌门（Bacteroidetes）和厚壁菌门（Firmicutes），比例分别为40%和35%。而在处