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鸡柔嫩艾美耳球虫微线蛋白-2：真核表达、免疫原性及应用潜力探索

一、引言

1.1研究背景

鸡球虫病是一种由艾美耳球虫引起的肠道寄生虫病，对养鸡业危害巨大，是全球范围内养鸡业面临的主要挑战之一。全世界每年因球虫病造成的损失大约是80亿美元，我国每年用于肉鸡的抗球虫药费用达6-18亿元人民币。该病主要发生于15-50日龄的雏鸡，发病率可高达80%，死亡率20-50%，病愈的雏鸡生长受阻，增重缓慢。成年鸡感染后多为带虫者，虽不发病，但增重和产蛋能力降低，是传播球虫病的重要病源。

当前，鸡球虫病的防治主要依赖药物和疫苗。药物防治方面，常用的抗球虫药物包括聚醚类离子载体抗生素（如马杜霉素、盐霉素和莫能菌素等）和化学合成类抗球虫药物（如氨丙啉、克球粉、妥曲珠利和地克珠利等）。然而，长期使用抗球虫药物导致球虫耐药性问题日益严重，使得药物的防治效果逐渐降低，甚至出现用药后仍爆发球虫病的情况。同时，药物残留问题也给禽畜产品的食用安全带来了很大的影响，过多的药物残留通过食物链威胁人体的健康。在疫苗防治方面，目前上市的球虫疫苗主要是活卵囊疫苗，使用这种疫苗尤其是强毒性的疫苗会对环境当中的球虫卵囊及原有球虫的种群生态产生一定的影响，有散毒之嫌。另外，球虫疫苗本身对鸡的健康有害，多数球虫疫苗接种后可能会出现接种的应激，并且会使鸡群的料肉比升高。免疫力的诱导需要一定的时间，在这一个时间段之内不能使用抗球虫药，但是这一段时间仍然有发生球虫的风险。因此，研发新型、高效、安全的鸡球虫病防治方法迫在眉睫。

微线蛋白（micronemeproteins，MICs）是球虫入侵宿主细胞过程中发挥关键作用的一类蛋白。在球虫入侵宿主细胞时，微线体释放微线蛋白，这些蛋白能够与宿主细胞表面的受体结合，介导球虫与宿主细胞的黏附，并参与形成纳虫空泡，从而帮助球虫进入宿主细胞。其中，微线蛋白-2在球虫入侵机制中扮演着不可或缺的角色，其特殊的结构和功能使其成为抗球虫疫苗研发的潜在重要靶点。对微线蛋白-2进行深入研究，有望为鸡球虫病的防治开辟新的途径，提供更有效的解决方案，具有重要的理论和实践意义。

1.2研究目的与意义

本研究旨在通过真核表达技术获得鸡柔嫩艾美耳球虫微线蛋白-2，并对其免疫原性进行深入研究，为开发新型鸡球虫病疫苗奠定基础。从理论意义来看，深入了解微线蛋白-2的结构、功能及其在球虫入侵宿主细胞过程中的作用机制，有助于揭示鸡球虫病的发病机理，丰富寄生虫学和免疫学的理论知识，为进一步研究球虫与宿主之间的相互作用提供理论依据。从实践意义而言，若能证实微线蛋白-2具有良好的免疫原性，将为新型鸡球虫病疫苗的研发提供关键的候选抗原。这不仅有助于解决当前鸡球虫病防治中面临的药物耐药性和疫苗安全性等问题，还能降低养鸡业因球虫病造成的经济损失，提高养鸡业的经济效益和可持续发展能力，保障禽肉和禽蛋等产品的质量安全，对促进整个养鸡业的健康发展具有重要的推动作用。

1.3国内外研究现状

在鸡球虫病防治研究方面，国内外取得了众多成果，但也面临着诸多挑战。药物防治上，自20世纪30年代发现磺胺类药物可治疗鸡球虫病以来，相继研发出了多种抗球虫药物。如离子载体类药物通过与碱性金属离子相互作用，辅助虫体细胞膜离子加速运转，使虫体细胞膜功能失调而死亡，代表药物有拉沙里菌素、海南霉素等；化学合成类药物作用机制各异，像地克珠利影响球虫体内嘧啶，造成DNA合成受阻从而灭杀球虫。然而，球虫的抗药性问题愈发严峻，不同药物的耐药性产生速度不同，如氯羟吡啶与喹啉类耐药性产生速度快，聚醚类抗生素相对较慢。为应对这一问题，国内外普遍倡导合理用药，包括定期更换药物、联合用药以及根据鸡的生长阶段选择合适药物等措施。在免疫防治方面，国外早在1952年就研制出了商用球虫疫苗，目前市场上的球虫疫苗主要有活疫苗、重组蛋白疫苗和核酸疫苗等。活疫苗虽能刺激机体产生较好的免疫反应，但存在毒力返强、散毒等风险；重组蛋白疫苗和核酸疫苗安全性较高，但免疫效果有待进一步提高。国内在疫苗研发上也投入了大量研究，致力于开发安全高效的新型疫苗。

关于微线蛋白的研究，国内外均有涉及。微线蛋白作为球虫入侵宿主细胞的关键分子，受到了广泛关注。国外研究详细解析了多种微线蛋白的结构和功能，发现其在球虫入侵、黏附等过程中的重要作用机制。例如，通过基因敲除和突变技术，明确了某些微线蛋白的特定结构域与宿主细胞受体结合的关键位点。国内研究则侧重于微线蛋白的免疫原性分析和应用研究，探索将其作为疫苗候选抗原的可行性。如通过构建重组表达载体，表达并纯化微线蛋白，检测其免疫小鼠后产生的免疫应答反应，发现部分微线蛋白能够诱导机体产生特异性抗体和细胞免疫反应。但目前对于微线蛋白-2的研究还相