T_NAIA 0290-2024 一次性使用卫生用品中溶血性链球菌检验实时荧光PCR法.docxVIP

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T/NAIA

团体标准

T/NAIA0290—2024

一次性使用卫生用品中溶血性链球菌检验

实时荧光PCR法

DeterminationofStreptococcuspyogenesindisposablesanitaryproducts—

RealtimePCRmethod

2024-05-17发布2024-05-30实施

宁夏化学分析测试协会发布

I

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目次

前言 II

1范围 1

2规范性引用文件 1

3术语和定义 1

4原理 1

5试剂和材料 1

6仪器和设备 2

7实验操作步骤 2

8结果分析及表述 3

9预防污染措施 4

附录A 5

附录B 6

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II

前言

本文件按照GB/T1.1-2020《标准化工作导则第1部分：标准化文件的结构和起草规则》的规定起草。

本文件由宁夏计量质量检验检测研究院提出。

本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。

本文件起草单位：宁夏计量质量检验检测研究院、宁夏食品检测研究院、宁夏固原师范学院。

本文件主要起草人：姚博伟、魏嘉雯、简敏捷、邢雅琴、吕晓东、姜晨、冯秀娟、高俊峰、张孝亮、王海瑞、陈璐、张哲、田菊梅。

本文件为首次发布。

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1

一次性使用卫生用品中溶血性链球菌检验

实时荧光PCR法

1范围

本文件规定了一次性使用卫生用品中溶血性链球菌的实时荧光PCR检测方法。

本文件适用于一次性使用卫生用品中溶血性链球菌的定性检测。

2规范性引用文件

下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。

GB/T6682分析实验室用水规则和试验方法

GB15979一次性使用卫生用品卫生标准

GB/T19495.2转基因产品检测实验室技术要求

GB/T27403实验室质量控制规范食品分子生物学检测

3术语和定义

下列术语和定义适用于本文件。

3.1一次性一次性使用卫生用品

使用一次后即丢弃的、与人体直接或间接接触的、并为达到人体生理卫生或卫生保健（抗菌或抑菌）目的而使用的各种日常生活用品，产品形状可以是固体或液体。例如，一次性使用手套或指套（不包括医用手套或指套）、纸巾、湿巾、卫生湿巾、电话膜、帽子、口罩、妇女经期卫生用品（包括卫生护垫）、尿布等排泄物卫生用品（不包括厕所用纸）等。

3.2DNA(deoxyribonuleicacid)：脱氧核糖核酸

3.3ska(streptokinasegene)：链激酶基因

3.4PCR(polymerasechainreaction)：聚合酶链式反应

3.5Ct值：每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数

4原理

一次性使用卫生用品样品经扩增培养后，提取增菌液中DNA，以提取的DNA为模板，以溶血性链球菌中（ska）基因中相对保守且高度特异的引物和探针进行目标物的实时荧光PCR扩增，根据Ct值判断样品中是否含有溶血性链球菌。

5试剂和材料

试剂的配制及试验中的操作规范应按GB/T27403的规定执行。

除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T6682规定的一级水。所有试剂均用无DNA酶污染的容器分装。

5.1试剂

5.1.1葡萄糖肉汤培养基：见附录A.1。

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2

5.1.2PCR扩增引物序列：见附录B.1。

5.1.3荧光探针序列见附录B.1。

5.1.42X荧光定量PCR预混液。

5.1.5商品化DNA抽提试剂盒。

5.1.6溶血性链球菌和大肠埃希氏菌标准菌株：来源自国家认可的菌种保藏机构。

5.2耗材

5.2.1离心管：200μL、1.5ml、5mL、10mL。

5.2.2PCR反应管：单管、八联管或96孔PCR微孔板。

6仪器和设备

6.1分析天平：感量0.01g。

6.2微量可调移液器：单道:1~10μL、10~100μL