CN114705854B 一种检测沙门氏菌的适体生物传感器及其制备方法与应用 （东北农业大学）.docxVIP

(19)国家知识产权局

(12)发明专利

(10)授权公告号CN114705854B(45)授权公告日2025.07.11

(21)申请号202210241766.3

(22)申请日2022.03.11

(65)同一申请的已公布的文献号申请公布号CN114705854A

(43)申请公布日2022.07.05

(73)专利权人东北农业大学

地址150030黑龙江省哈尔滨市香坊区长

江路600号

(72)发明人姜毓君满朝新杨鑫焱庞立冬

(74)专利代理机构哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司23211

专利代理师邓宇

(51)Int.CI.

GO1N33/569(2006.01)

GO1N33/58(2006.01)

GO1N33/533(2006.01)

C12N15/115(2010.01)

G01N21/64(2006.01)

(56)对比文件

YujunJiangetal..ANovel

FluorescenceAptasensorBasedonMagnetic

Beads/GoldNanoparticles/DNA-Stabilized

SilverNanoclustersforDetectionof

SalmonellaTyphimurium.《Foods》.2022,1-12.

审查员张哲

权利要求书2页说明书8页序列表1页附图7页

(54)发明名称

一种检测沙门氏菌的适体生物传感器及其制备方法与应用

(57)摘要

114705854BCN一种检测沙门氏菌的适体生物传感器及其制备方法与应用，属于食品安全技术领域。为了解决现有技术检测沙门氏菌中存在的问题，本发明提供了一种适体生物传感器，其检测原理为SMBs-cDNA2复合物、适配体Apt2和AuNPs-cDNA3探针建立的夹心结构SMBs-Apt2-AuNPs荧光猝灭系统能够在没有沙门氏菌的情况下保持完整性，系统中的AuNPs与AgNCs发生FRET以猝灭AgNCs的荧光；在有沙门氏菌的情况下，沙门氏菌与作为连接桥梁的Apt2结合，SMBs-Apt2-AuNPs系统被破坏，在上清液中悬浮的AuNPs-cDNA3探针和结合Apt2的沙门氏菌通过磁分离被去除，从而导致荧光不被猝灭。本发明获得的适体生物传感器具有简单、成本低、速度快以及灵敏度高等特点，可

114705854B

CN

染。

CN114705854B权利要求书1/2页

2

1.一种快速检测沙门氏菌的适体生物传感器的制备方法，其特征在于，所述适体生物传感器包括由SMBs-cDNA2复合物、适配体Apt2和AuNPs-cDNA3探针建立的夹心结构SMBs-Apt2-AuNPs,和被用作荧光信号的以DNA为模板合成的银纳米簇DNA-AgNCs;所述SMBs-cDNA2复合物由链霉亲和素磁珠与生物素修饰的核酸链cDNA2连接，cDNA2的核苷酸序列如SEQIDNO.1所示；所述AuNPs-cDNA3探针由AuNPs溶液与巯基修饰的cDNA3制备而成，cDNA3的核苷酸序列如SEQIDNO.2;所述适配体Apt2的核苷酸序列如SEQIDNO.3所示；所述DNA模板的核苷酸序列如SEQIDNO.4所示；

在没有沙门氏菌的情况下，SMBs-Apt2-AuNPs系统保持完整性，当加入DNA-AgNCs时，系统中的AuNPs与AgNCs发生荧光共振能量转移以猝灭AgNCs的荧光；在有沙门氏菌的情况下，在上清液中悬浮的AuNPs-cDNA3探针和结合Apt2的沙门氏菌通过磁分离被去除，从而导致荧光不被猝灭；

所述适体生物传感器的制备方法包括如下步骤：

(1)制备SMBs-cDNA2复合物：SMBs经1×BW缓冲液洗涤后，重悬于2×BW缓冲液中，加入等体积的cDNA2溶液孵育，去除上清，经1×BW缓冲液洗涤后，重悬于PBS溶液中，得到SMBs-cDNA2复合物；

(2)制备AuNPs-cDNA3探针：将巯基修饰的cDNA3与AuNPs溶液混合，孵育后加入磷酸缓冲液A,再次进行孵育，分多次缓慢加入含有2mol/LNaCl的磷酸缓冲液B进行老化，直至溶液中NaCl浓度达到0.2mol/