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基于蛋白质基因组学解析抗Cry1Ac小菜蛾中肠抗性机制

一、引言

1.1研究背景与意义

小菜蛾（Plutellaxylostella），属鳞翅目菜蛾科，是一种世界性迁飞害虫，在除南极洲外的各大洲均有分布。其生命周期短，在25°C时仅为14天，但繁殖能力极强，一只雌虫平均可产卵200粒左右，多的甚至能达到500粒，这使得其种群数量能够在短时间内迅速增长。小菜蛾主要侵害甘蓝、紫甘蓝、青花菜、菜心、芥菜、花椰菜、白菜、油菜、萝卜等十字花科植物，对全球蔬菜产业造成了严重威胁。初龄幼虫仅取食叶肉，留存表皮，在菜叶上形成诸多透明小斑，俗称“开天窗”；3至4龄幼虫能将菜叶食成孔洞与缺刻，严重时全叶几近被食成网状。在苗期，小菜蛾常聚集中心叶进行为害，影响包心；在留种株上，会损害嫩茎、幼荚及籽粒，导致蔬菜产量和品质大幅下降。据相关研究表明，小菜蛾每年给全球农业造成约40-50亿美元的巨大经济损失，对我国蔬菜产业的危害也不容小觑。

为了控制小菜蛾的危害，化学杀虫剂被广泛使用。然而，长期大量使用化学杀虫剂导致小菜蛾对多种杀虫剂产生了不同程度的抗药性，这不仅使得防治效果大打折扣，农民不得不增加用药量和用药次数来控制虫害，进而增加了生产成本，还加剧了农药对环境的污染，威胁到农产品的质量安全。据监测，在重点蔬菜产区，小菜蛾种群对阿维菌素、氯虫苯甲酰胺等常用杀虫剂已处于较高水平抗性，对一些传统杀虫剂的抗性倍数甚至达到了数千倍。抗性的产生使得原本有效的防治策略面临严峻挑战，寻找新的防治方法和技术迫在眉睫。

苏云金芽孢杆菌（Bacillusthuringiensis，Bt）产生的Cry1Ac杀虫晶体蛋白是一种对鳞翅目昆虫具有高度特异性毒性的蛋白，其作用机制独特，能与靶标昆虫的肠上皮细胞表面受体结合，形成孔道，导致细胞膜破坏和昆虫死亡，从而有效控制农业害虫。基于Cry1Ac杀虫晶体蛋白研发的Bt生物杀虫剂和转基因作物，因其高效、环保等优点，在害虫防治中得到了广泛应用。然而，随着Bt生物杀虫剂和转基因作物的大面积推广使用，小菜蛾对Cry1Ac杀虫晶体蛋白的抗性问题也日益突出。小菜蛾已成为第一个被报道在田间对Bt生物杀虫剂进化产生高抗性的农业害虫，这严重威胁到Bt生物防治技术的可持续应用。

深入研究小菜蛾对Cry1Ac杀虫晶体蛋白的抗性机制，对于开发有效的抗性治理策略、延长Bt生物防治技术的使用寿命以及保障农业可持续发展具有重要意义。通过研究小菜蛾抗Cry1Ac近等基因系中肠蛋白质组的变化，可以从分子层面揭示小菜蛾对Cry1Ac的抗性机制，为开发新的防治方法和技术提供理论依据。同时，本研究也有助于丰富昆虫抗药性理论，为其他害虫的抗性研究提供参考。

1.2研究现状

小菜蛾对杀虫剂的抗药性研究一直是昆虫学领域的研究热点。国内外学者已对小菜蛾的抗药性现状、抗性机制以及抗性治理策略等方面进行了大量研究。研究表明，小菜蛾对有机磷、氨基甲酸酯、拟除虫菊酯、阿维菌素、氯虫苯甲酰胺等多种杀虫剂均产生了抗药性，其抗性机制主要包括靶标抗性、代谢抗性、行为抗性和表皮穿透性降低等。例如，小菜蛾对阿维菌素的抗性与γ-氨基丁酸（GABA）受体基因的突变有关；对氯虫苯甲酰胺的抗性与鱼尼丁受体基因的点突变密切相关。

中肠是昆虫消化和吸收营养物质的重要器官，也是杀虫剂作用的主要靶标部位之一。中肠蛋白质基因组学研究可以全面揭示中肠蛋白质的组成、结构和功能，为深入了解昆虫的生理代谢、生长发育以及对杀虫剂的响应机制提供重要信息。近年来，随着蛋白质组学技术的不断发展，中肠蛋白质基因组学在昆虫研究中的应用越来越广泛。已有研究利用蛋白质组学技术分析了小菜蛾中肠蛋白质组在不同发育阶段、不同环境条件以及不同杀虫剂处理下的变化，发现了一些与小菜蛾生长发育、消化代谢和抗药性相关的蛋白质。

近等基因系（Near-IsogenicLines，NILs）是指遗传背景相同，仅在个别基因位点上存在差异的一组品系。近等基因系在昆虫抗药性研究中具有重要应用价值，它可以排除遗传背景差异对实验结果的干扰，准确地鉴定出与抗药性相关的基因和蛋白质。目前，已有研究利用近等基因系研究了小菜蛾对鱼尼丁受体类杀虫剂、阿维菌素等的抗性机制，发现了一些与抗性相关的基因和蛋白质，为小菜蛾抗药性机制的研究提供了重要线索。然而，关于小菜蛾抗Cry1Ac近等基因系中肠蛋白质基因组学的研究还相对较少，对小菜蛾中肠蛋白质组在抗Cry1Ac过程中的变化规律及其抗性机制的了解还十分有限。

1.3研究目的与内容

本研究旨在以抗Cry1Ac近等基因系小菜蛾为研究对象，运用蛋白质基因组学技术，深入研究小菜蛾中肠蛋白质组在抗Cry1Ac过程中的变化规律，揭示小菜