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研究报告

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表面展示柔嫩艾美耳球虫EtMIC2蛋白重组乳酸菌的构建及免疫保护效果研究

一、引言

1.研究背景

(1)柔嫩艾美耳球虫（Eimeriatenella）是一种常见的禽类寄生虫，主要寄生于鸡的肠道，引起艾美耳球虫病。该病具有高度的传染性，严重威胁着养鸡业的健康发展。据统计，全球每年因艾美耳球虫病造成的经济损失高达数十亿美元。柔嫩艾美耳球虫感染后，鸡只会出现食欲下降、生长缓慢、产蛋量降低、肠道炎症等症状，甚至导致死亡。因此，寻找有效的预防和治疗方法对于控制艾美耳球虫病具有重要意义。

(2)艾美耳球虫病的传统治疗方法主要依赖于化学药物，如尼卡巴嗪、磺胺类药物等。然而，长期使用化学药物会导致球虫耐药性的产生，并可能对鸡只健康产生不良影响。此外，化学药物的使用还会对环境造成污染。近年来，随着人们对生物安全、动物福利和环境保护的重视，开发新型绿色防控技术成为研究热点。表面展示蛋白作为一种新型免疫原，具有高效、安全、环保等优点，在动物疫苗领域具有广阔的应用前景。研究表明，将柔嫩艾美耳球虫表面展示蛋白与乳酸菌载体结合，可以有效地诱导鸡只产生特异性免疫反应，从而预防艾美耳球虫病。

(3)乳酸菌作为一种益生菌，在动物肠道内具有广泛的生态位，对宿主具有调节肠道菌群、增强免疫力等作用。近年来，乳酸菌在动物疫苗载体中的应用研究取得了显著进展。研究表明，将柔嫩艾美耳球虫表面展示蛋白与乳酸菌载体结合，可以有效地提高蛋白的表达水平和免疫原性。例如，将柔嫩艾美耳球虫的EgG1蛋白展示于乳酸菌表面，可以诱导鸡只产生特异性抗体，从而提高鸡只对柔嫩艾美耳球虫的抵抗力。此外，乳酸菌载体还具有降低免疫抑制、减轻药物副作用等优点，使其在动物疫苗领域具有广阔的应用前景。因此，研究表面展示柔嫩艾美耳球虫蛋白重组乳酸菌的构建及其免疫保护效果，对于开发新型绿色防控技术具有重要的理论和实践意义。

2.研究目的

(1)本研究旨在构建表面展示柔嫩艾美耳球虫EtMIC2蛋白的重组乳酸菌载体，通过优化基因克隆、表达载体的构建和乳酸菌转化等环节，提高重组蛋白的表达水平和免疫原性。

(2)研究将评估重组乳酸菌在鸡体内的免疫保护效果，通过免疫学指标检测和攻虫实验，分析重组蛋白对柔嫩艾美耳球虫的免疫防护能力，为开发新型绿色防控技术提供理论依据。

(3)本研究还旨在探讨重组乳酸菌在预防柔嫩艾美耳球虫病中的应用前景，通过比较不同剂量和免疫程序的免疫效果，为实际生产中疫苗的推广应用提供科学依据。

3.研究意义

(1)本研究对于防控柔嫩艾美耳球虫病具有重要意义。据世界动物卫生组织（OIE）报告，全球每年约有10亿只鸡受到艾美耳球虫病的威胁，造成的经济损失高达数十亿美元。传统的化学药物防治方法存在耐药性、药物残留和环境污染等问题。而本研究构建的表面展示柔嫩艾美耳球虫EtMIC2蛋白的重组乳酸菌载体，作为一种新型绿色防控技术，有望有效降低艾美耳球虫病的发病率，减少经济损失。

(2)本研究的成果对于动物健康和食品安全具有积极作用。艾美耳球虫病不仅影响鸡只的生长发育和产蛋性能，还可能通过食物链传播给人，引发人类疾病。通过提高鸡只对柔嫩艾美耳球虫的抵抗力，本研究有助于保障动物健康和食品安全。此外，本研究采用乳酸菌作为载体，具有生物安全性高、环境友好等优点，有助于减少化学药物的使用，保护生态环境。

(3)本研究对于推动动物疫苗研发和产业升级具有重要意义。随着生物技术的发展，表面展示蛋白疫苗在动物疫苗领域具有广阔的应用前景。本研究构建的重组乳酸菌载体有望为艾美耳球虫病防控提供新的思路，推动动物疫苗研发和产业升级。同时，本研究有助于提高我国在动物疫苗领域的国际竞争力，为我国畜牧业的发展贡献力量。

二、文献综述

1.柔嫩艾美耳球虫与艾美耳球虫病

(1)柔嫩艾美耳球虫（Eimeriatenella）是艾美耳球虫属中的一种，主要寄生于鸡的肠道，引起艾美耳球虫病。该病是全球养鸡业中常见的寄生虫性疾病之一，对鸡只的健康和生产性能造成严重影响。据统计，全球每年约有10亿只鸡受到艾美耳球虫病的侵害，造成的经济损失高达数十亿美元。柔嫩艾美耳球虫感染后，鸡只会出现食欲下降、生长缓慢、产蛋量降低、肠道炎症等症状，严重时甚至导致死亡。

(2)艾美耳球虫病的流行病学研究表明，该病主要通过鸡只之间的粪便传播。球虫卵囊在鸡舍内广泛分布，鸡只通过摄入含有球虫卵囊的饲料或饮水而感染。球虫卵囊在鸡只肠道内孵化成幼虫，随后侵入肠道上皮细胞进行繁殖。球虫的生命周期包括无性生殖和有性生殖两个阶段，无性生殖阶段产生大量的子孢子，通过鸡只粪便排出体外，形成新的卵囊，从而完成传播。

(3)艾美耳球虫病的防控一直是养鸡业关注的焦点。传统的防治方法主要依赖于化学药物，如尼卡巴嗪、磺胺类药物等