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研究报告

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表达猪大肠杆菌987P-F18多表位肽重组乳酸乳球菌的构建及表征

一、引言

1.研究背景

(1)随着全球人口的增长和城市化进程的加快，食品安全问题日益凸显。特别是细菌性食物中毒事件频繁发生，严重威胁着人类的健康和生命安全。大肠杆菌（Escherichiacoli）作为常见的食源性病原菌之一，其引起的感染和食物中毒事件在全球范围内造成了巨大的经济损失和社会影响。据报道，每年约有2000万至2.5亿人感染大肠杆菌，其中约20万至60万人死亡。因此，针对大肠杆菌的防控研究已成为公共卫生领域的重要课题。

(2)猪大肠杆菌（E.coliO157:H7）是引起人类食物中毒的主要病原菌之一，其产生的毒素能够导致严重的肠道疾病。近年来，我国猪大肠杆菌感染病例呈上升趋势，尤其是在夏季高温多湿的季节，猪大肠杆菌的感染风险更高。据统计，我国每年因猪大肠杆菌感染导致的病例数超过10万例，其中重症病例数占比较高。为了有效预防和控制猪大肠杆菌的传播，亟需开发出高效、安全的防控策略。

(3)乳酸乳球菌（Lactococcuslactis）作为一种广泛应用的益生菌，在食品加工、生物制药等领域具有广泛的应用前景。近年来，利用乳酸乳球菌作为表达载体，构建表达外源蛋白的重组菌株，已成为生物技术领域的研究热点。研究表明，乳酸乳球菌表达的外源蛋白具有较好的生物活性，且安全性高。因此，将猪大肠杆菌987P-F18多表位肽基因构建到乳酸乳球菌中，有望为猪大肠杆菌的防控提供新的思路和方法。通过研究猪大肠杆菌987P-F18多表位肽重组乳酸乳球菌的构建及表征，将为食品安全和公共卫生事业做出贡献。

2.研究目的

(1)本研究旨在构建表达猪大肠杆菌987P-F18多表位肽的乳酸乳球菌重组菌株，并对其进行全面的表征和分析。猪大肠杆菌作为重要的食源性病原菌，其感染引起的食物中毒事件在全球范围内频发，给人类健康和公共卫生安全带来严重威胁。据世界卫生组织（WHO）统计，每年全球因食源性疾病导致的死亡人数高达220万人，其中食源性疾病暴发事件中有很大一部分是由细菌性病原体引起的。因此，针对猪大肠杆菌的有效防控策略的研究具有重要的公共卫生意义。本研究通过构建表达猪大肠杆菌987P-F18多表位肽的乳酸乳球菌重组菌株，旨在为开发新型生物防治技术和疫苗候选株提供科学依据和技术支持。

(2)本研究的目标之一是验证猪大肠杆菌987P-F18多表位肽在乳酸乳球菌中的表达水平，并分析其免疫原性。猪大肠杆菌987P-F18多表位肽作为重要的抗原表位，已被证实具有强烈的免疫原性，能够诱导宿主产生特异性免疫反应。在已有的研究中，多表位肽疫苗在动物实验中表现出良好的免疫效果，如美国食品药品监督管理局（FDA）已批准用于人类免疫缺陷病毒（HIV）感染的Tivivac疫苗。本研究将通过构建表达猪大肠杆菌987P-F18多表位肽的乳酸乳球菌重组菌株，进一步探讨其免疫原性，为开发基于多表位肽的新型疫苗提供实验依据。

(3)本研究还旨在优化乳酸乳球菌的表达系统，以提高猪大肠杆菌987P-F18多表位肽的表达效率。在已有的研究基础上，通过优化表达载体、选择合适的启动子、调控转录翻译水平等手段，有望提高目标蛋白的表达水平。据报道，优化表达系统可以使目的蛋白的表达水平提高数倍甚至数十倍。此外，本研究还将对表达产物进行纯化、鉴定和活性分析，以期为后续的动物实验和临床试验提供有力支持。通过构建表达猪大肠杆菌987P-F18多表位肽的乳酸乳球菌重组菌株，本研究有望为我国食品安全和公共卫生事业做出贡献，并推动生物技术在食品安全领域的应用。

3.研究意义

(1)猪大肠杆菌作为一种重要的食源性病原菌，其引起的食物中毒事件在全球范围内频发，对人类健康构成了严重威胁。据统计，每年有数百万人因食源性疾病而受到感染，其中部分病例由猪大肠杆菌引起。因此，开展猪大肠杆菌相关的研究对于预防和控制食源性疾病具有重要意义。本研究通过构建表达猪大肠杆菌987P-F18多表位肽的乳酸乳球菌重组菌株，不仅有助于深入了解猪大肠杆菌的致病机制，还为开发新型生物防治技术和疫苗候选株提供了可能。

(2)乳酸乳球菌作为一种广泛应用于食品和医药领域的益生菌，具有生物安全性和环境友好性。本研究将猪大肠杆菌987P-F18多表位肽基因构建到乳酸乳球菌中，不仅有助于拓展乳酸乳球菌的应用范围，也为食品安全提供了新的生物技术手段。此外，通过乳酸乳球菌表达的多表位肽疫苗，有望降低猪大肠杆菌感染的风险，从而减少食源性疾病的发生率，对于保障公共健康具有显著的社会经济效益。

(3)随着全球化和贸易的发展，食源性疾病的风险日益增加。本研究构建的猪大肠杆菌987P-F18多表位肽重组乳酸乳球菌，不仅为我国食品安全提供了技