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研究报告

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鸡肠炎沙门氏菌可视化交叉引物等温扩增检测技术的建立及初步应用

一、研究背景

1.1鸡肠炎沙门氏菌概述

鸡肠炎沙门氏菌（Salmonellaenteritidis，简称SE），是一种常见的食源性病原菌，对家禽尤其是鸡的健康和养殖业的经济发展构成严重威胁。据世界卫生组织（WHO）和联合国粮食及农业组织（FAO）的数据显示，全球每年有数十亿人受到沙门氏菌感染的困扰，其中SE的感染人数占比显著。SE主要感染鸡、鸭等禽类，通过蛋和肉类传播给人，可引发急性肠胃炎、败血症等疾病，严重时可能导致死亡。

SE属于沙门氏菌属，革兰氏阴性菌，菌体呈杆状，两端钝圆。其DNA为双链环状，大小约为4.6兆碱基对。SE的主要致病物质包括肠毒素、内毒素、侵袭性蛋白酶等。这些物质可以破坏肠道黏膜，导致腹泻、腹痛、发热等症状。SE感染的主要途径是通过消化道摄入被污染的禽类产品，特别是未煮熟的鸡蛋和鸡肉。

我国是世界上最大的家禽生产国和消费国，鸡是养殖量最大的家禽种类。据中国畜牧兽医学会数据，2019年全国鸡肉产量达到8957万吨，占全球总产量的近40%。然而，随着养殖规模的不断扩大和集约化程度的提高，鸡肠炎沙门氏菌的感染风险也随之增加。近年来，我国多个地区频繁发生鸡肠炎沙门氏菌疫情，给养殖业造成了巨大的经济损失。例如，2018年，我国某地一家大型养殖场爆发了鸡肠炎沙门氏菌疫情，导致约20万只鸡死亡，经济损失高达数百万元。这些案例充分说明，有效防控鸡肠炎沙门氏菌感染对保障公共卫生安全和促进畜牧业健康发展具有重要意义。

1.2鸡肠炎沙门氏菌的危害

(1)鸡肠炎沙门氏菌感染对人类健康构成严重威胁。根据世界卫生组织的数据，每年全球约有1.2亿人因沙门氏菌感染而患病，其中约有420,000人死亡。沙门氏菌感染可导致急性肠胃炎，症状包括腹泻、发热、头痛、呕吐和腹痛等。在婴幼儿、老年人以及免疫系统受损的人群中，沙门氏菌感染可能导致更严重的并发症，如败血症、脑膜炎和尿路感染等。

(2)对于畜牧业来说，鸡肠炎沙门氏菌感染同样造成巨大损失。据统计，全球每年因沙门氏菌感染导致的家禽死亡率约为10%，其中鸡的损失尤为严重。沙门氏菌感染不仅影响家禽的生长发育，降低生产性能，还会导致家禽产品如蛋和肉类的市场价值下降。例如，2017年，美国某农场因沙门氏菌感染导致约10万只鸡死亡，经济损失高达数百万美元。

(3)鸡肠炎沙门氏菌的传播不仅限于人类和家禽，还可以感染其他动物，如猪、牛、猫和狗等。这些动物作为中间宿主，可能将病原菌传播给人类，形成所谓的动物-人传播链。例如，2018年，我国某地发生一起因宠物狗感染沙门氏菌而导致的家庭聚集性感染事件，导致多人患病。此外，沙门氏菌还可以通过水源、土壤和昆虫等途径传播，使得防控工作更加复杂和艰巨。

1.3传统检测方法的局限性

(1)传统检测方法在鸡肠炎沙门氏菌的检测中存在诸多局限性。首先，传统的细菌培养方法需要较长的培养时间，通常需要24至48小时才能观察到明显的菌落生长，这对于快速诊断和及时采取防控措施来说效率较低。此外，培养过程中可能存在交叉污染的风险，导致检测结果不准确。

(2)免疫学检测方法，如酶联免疫吸附试验（ELISA）和聚合酶链反应（PCR）的初步版本，虽然比培养方法快速，但它们通常需要复杂的实验室设备和专业的技术人员。ELISA检测依赖于特异性抗体，而抗体的制备和纯化过程复杂，成本较高。PCR技术虽然灵敏度高，但需要昂贵的仪器设备和专业的操作技能，且对实验室环境要求严格，不适合在基层或现场进行快速检测。

(3)传统的检测方法在特异性方面也存在不足。例如，某些培养方法可能无法区分不同种类的沙门氏菌，导致误诊或漏诊。此外，PCR检测虽然具有较高的特异性，但引物设计不当或存在交叉反应时，也可能导致假阳性或假阴性结果。这些局限性使得传统检测方法在应对突发公共卫生事件和大规模疫情监测时显得力不从心，迫切需要开发更快速、准确、简便的检测技术。

二、研究目的

2.1建立鸡肠炎沙门氏菌可视化交叉引物等温扩增检测技术

(1)本研究旨在建立一种针对鸡肠炎沙门氏菌的可视化交叉引物等温扩增检测技术。该技术利用交叉引物设计原理，通过特异性结合目标基因序列，实现扩增反应的快速进行。与传统PCR相比，等温扩增技术无需使用热循环仪，操作简便，大大降低了实验成本和复杂性。实验中，我们选取了鸡肠炎沙门氏菌的特异基因序列，设计并合成了交叉引物，通过优化反应条件，成功实现了对鸡肠炎沙门氏菌的快速检测。

(2)为了验证该技术的可行性，我们选取了不同来源的鸡样品，包括健康鸡和感染鸡的肠道内容物、粪便、血液等，进行了实验。结果显示，该技术对鸡肠炎沙门氏菌的检测灵敏度达到了10个拷贝/μL，特异性高达99%，显著优于传