肿瘤药理实验方法.pptVIP

肿瘤药理实验方法;初代培养物开始第一次传代培养后的细胞，即称之为细胞系（CellLine）。

从一个经过生物学鉴定的细胞系用单细胞分离培养或通过筛选的方法，由单细胞增殖形成的细胞群，称细胞株（Cellstrain）。;●肿瘤细胞体外实验方法

（动物的，人的）

●动物肿瘤体内实验方法

（移植性、诱发性、自发性）

●肿瘤转移的动物实验模型

●肿瘤免疫药理研究方法;体内实验

Invivo

;肿瘤药理学体内实验方法;

;不同种类的动物对致癌物质的敏感

性不同，其癌自发率也不同。常用于自

发、诱发或移植的动物有：

小鼠、裸鼠、金黄地鼠、大鼠

豚鼠、两栖类动物如蛙、鸟类。

其它许多家畜如猪马牛羊犬猫家兔

等都可发生各种肿瘤。;小鼠

小鼠肿瘤自发率高，其自发性肿瘤无论

是从组织发生、临床过程以及组织形态学上

都与人类的肿瘤接近。所以小鼠目前广泛用

于癌、肉瘤、白血病以及其它恶性肿瘤的研

究。进行抗肿瘤药物筛选，小鼠自发性肿瘤

模型优于移植性肿瘤模型。;裸鼠

裸鼠是一种独特的纯系动物，全身无毛，先天性

无胸腺，T淋巴细胞缺乏，细胞免疫功能缺乏，对异

体移植几乎无免疫排斥反应，可接受异系、异种肿

瘤肿瘤移植等，有“活试管”之称。自从1969年

Rygaard、Povlesev二氏将人类肿瘤异种移植于裸鼠首

次获得成功后，它在肿瘤研究中已被广泛利用。

目前移植于裸鼠较为成功的人类肿瘤有：结肠癌、

乳腺癌、肺癌、卵巢癌、宫颈癌、白血病等。;裸小鼠的费用昂贵，饲养时对实验室的条件要求高，小鼠不易大量繁殖。因而一般不用于药物的初筛选研究。由于先天性免疫缺乏，因而在一般情况下也不用于免疫药物的研究。;C57BL/6小鼠

小鼠类的一种，黑毛，体型小，性情较温顺，易于饲养管理，对药物敏感性好，为研究Lewis肺癌所选小鼠。费用适中，饲养条件不太高，易大量繁殖，因而一般可用于药物的体内初筛选研究。（Lewis肺癌为C57BL/6小鼠来源的肿瘤）;大鼠

大鼠也广泛用于肿瘤研究。与小鼠相比，大鼠的体型较大，供给的组织较多，便于进??手术等实验操作。大鼠的肝脏对致癌物质很敏感，可用二乙基亚硝胺，二甲基偶氮苯（DAB）复制大鼠肝癌动物模型，还可用甲基苄基亚硝胺诱发大鼠食管癌动物模型。

大鼠的自发性癌变的发生率较低。;金黄地鼠：金黄地鼠是肿瘤学实验研究中最常用的动

物，她广泛用于研究肿瘤的增殖、致癌、抗癌、肿瘤转

移、康癌药物的筛选等。

豚鼠：曾被认为是很少发生肿瘤的动物，近年发现豚鼠也可发生自发性肿瘤，例如支气管乳头腺瘤、白血病等。

两栖类动物：蛙类无毛，光滑的皮肤与人类接近，可为皮肤癌的研究提供实验模型。

鸟类：鸡和其它鸟类对肿瘤病毒的研究具有极高的实用价值尤其是对于造血系统和间叶组织肿瘤病毒株具有易感性。

鱼类：鱼类也可发生不少自发肿瘤，它们对化学致癌物十分敏感，例如用黄曲霉素、二乙基亚硝胺等可诱发鱼类肝脏肿瘤和肾母细胞瘤。

其它：许多家畜如马牛羊猪犬猫家兔等都可发生各种肿瘤。

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;动物肿瘤体内实验方法;移植性动物肿瘤模型;移植性动物肿瘤模型;人体肿瘤动物体内移植模型的建立;小白鼠;人体肿瘤动物体内移植模型的建立;1.消化洗涤将对数增殖期的细胞或腹水瘤细胞经消化脱壁后，用培养液洗涤l次。

2.冻存细胞配制含有保护剂(10%－15％的DMSO，甘油等)的培养液作为细胞冻存液。以肿瘤细胞在细胞冻存液中的密度为l×l07/ml左右悬浮细胞。将细胞悬液加入到2ml塑料冻存管内。密封后注明标记。将冻存管放入4℃或－30℃低温冰箱内2h后，移入液氮罐内长期保存。

3.冻存细胞的复苏将冻存肿瘤细胞的冻存管从液氮罐内取出，立即置于37-40℃温水中，使冻存细胞在lmin内全部融化，1000r/min离心l0min，弃去上清液，用新鲜培养液稀释到所需细胞数，再进行培养。

●慢冻快融原则;1.体外培养扩增无菌条件下，将复苏的肿瘤细胞体外培养、扩增。

2.制备细胞悬液在对数生长期，用0.05％胰蛋白酶和0.02％乙二胺四乙酸（ethylenediaminetetraaceticacid,EDTA）消化1～2min，倾出消化液，加入无血清1640液洗涤，离心，计数，用无血清1640液或无菌生理盐水配成浓度为1×107/ml的细胞悬液。

3.接种肿瘤细胞在无菌环境中，消毒皮肤，用lml注射器抽吸取0.2ml细胞