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研究报告

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鸡球虫新型体外细胞培养模型的建立及其在药物评价中的应用

一、引言

1.鸡球虫病的概述

(1)鸡球虫病是一种广泛存在于全球的家禽寄生虫病，主要由艾美球虫属和泰泽球虫属的球虫引起。该病对养鸡业造成了巨大的经济损失，据统计，全球每年因鸡球虫病导致的损失高达数十亿美元。球虫卵囊在鸡舍环境中广泛分布，一旦鸡只接触到含有卵囊的土壤、饲料或饮水，就可能感染球虫病。

(2)鸡球虫病的临床症状多样，包括食欲减退、体重下降、腹泻、贫血、精神萎靡等。严重时，鸡只可能出现死亡。球虫病可分为急性型和慢性型，急性型多见于雏鸡，慢性型则常见于成年鸡。球虫卵囊在鸡体内发育成熟，经过无性繁殖和有性繁殖两个阶段，最终产生大量卵囊排出体外，形成新的感染源。

(3)鸡球虫病的流行病学特征表明，该病在温暖潮湿的环境中易于传播。球虫卵囊对外界环境具有较强的抵抗力，在适宜的温度和湿度条件下，可以存活数月甚至数年。此外，鸡球虫病的传播途径多样，包括直接接触、间接接触、空气传播等。在一些地区，鸡球虫病已经成为制约养鸡业发展的主要因素，因此，研究鸡球虫病的发病机制、传播途径和防控措施具有重要意义。

2.鸡球虫病对养鸡业的影响

(1)鸡球虫病对养鸡业的影响是多方面的，首先，它直接导致鸡只的生产性能下降。感染鸡球虫的鸡只通常会出现食欲不振、体重减轻、生长迟缓等症状，这直接影响了鸡只的增重速度和出栏时间。据统计，鸡球虫病可以导致鸡只增重速度降低30%以上，严重时甚至会导致鸡只死亡，给养殖户带来巨大的经济损失。

(2)其次，鸡球虫病还会对鸡只的免疫系统造成损害。球虫在鸡体内大量繁殖，会破坏肠道黏膜，导致肠道菌群失衡，进而影响鸡只的免疫功能。这不仅使得鸡只更容易感染其他疾病，还可能降低疫苗接种的效果。长期免疫抑制还会导致鸡只对饲料营养的吸收利用率下降，进一步加剧了饲料浪费。

(3)此外，鸡球虫病的防控成本也相当高昂。为了控制球虫病，养殖户需要采取多种措施，包括疫苗接种、药物防治、环境消毒、饲料管理等。这些措施不仅需要投入大量的资金，还需要养殖户投入大量的时间和精力进行管理和监督。在一些地区，由于球虫病的长期存在，养殖户不得不长期使用抗球虫药物，这不仅可能导致球虫产生耐药性，还可能对环境造成污染。因此，鸡球虫病不仅对养鸡业的直接经济效益造成影响，还对整个养殖行业的可持续发展构成了挑战。

3.现有鸡球虫病体外细胞培养模型的局限性

(1)现有鸡球虫病体外细胞培养模型在模拟鸡体内球虫生活史方面存在一定的局限性。这些模型通常使用哺乳动物细胞或昆虫细胞作为宿主细胞，而鸡球虫在其生命周期中主要在鸡的肠道上皮细胞中发育。这种差异可能导致球虫在体外培养条件下无法完全复制其正常的生命周期，从而影响实验结果的准确性。

(2)此外，现有的体外细胞培养模型往往难以完全模拟鸡肠道环境的复杂性和动态变化。鸡肠道内存在多种微生物和复杂的生化环境，这些因素对球虫的生存和繁殖至关重要。体外培养模型往往无法提供与鸡肠道相似的微生物群落和生化条件，这可能导致球虫在体外培养中的生长和繁殖能力与体内存在显著差异。

(3)最后，现有的鸡球虫病体外细胞培养模型在虫体形态和生理功能上可能与体内虫体存在差异。球虫在体外培养过程中可能会发生形态变化，甚至出现非典型虫体形态，这可能会影响实验结果的解读。此外，体外培养的虫体可能无法完全表现出其在鸡体内所具有的生理功能，如繁殖能力和对药物的敏感性，从而限制了模型在药物筛选和疾病研究中的应用。

二、新型鸡球虫体外细胞培养模型的建立

1.细胞系的选择与培养

(1)在建立鸡球虫新型体外细胞培养模型时，选择合适的细胞系至关重要。理想的细胞系应具有良好的生长特性、易于培养且对鸡球虫感染具有较高的易感性。目前，常用的细胞系包括鸡胚成纤维细胞（CEA-1）、鸡胚肝细胞（CEH-1）和鸡胚肾细胞（CER-1）等。这些细胞系均来源于鸡胚组织，与鸡球虫的宿主细胞有较高的相似性。

(2)细胞培养过程中，需严格控制培养条件，以确保细胞系正常生长。首先，应使用含有适宜浓度血清的基础培养基，如DMEM或MEM培养基，并添加适量抗生素以防止污染。其次，细胞的生长温度通常控制在37°C，CO2浓度为5%以维持细胞生长所需的pH环境。此外，细胞接种密度和传代频率也是影响细胞生长状态的重要因素，需要根据细胞系的生长特性进行调整。

(3)在细胞培养过程中，还需定期进行细胞形态学和生物学特性的观察，以确保细胞系的质量。这包括观察细胞的生长状态、形态变化、分裂指数等指标。同时，对细胞进行冷冻保存，以备后续实验使用。细胞系的冻存和复苏操作应遵循规范流程，避免细胞在冻存过程中发生损伤。通过以上措施，可以确保所选择的细胞系在体外培养条件下具有良好的生长特性，为后续鸡