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一株屎肠球菌的分离鉴定及抑菌特性

一、实验目的

1.1.了解屎肠球菌的生物学特性

(1)屎肠球菌（Enterococcusfaecalis）是一种革兰氏阳性球菌，广泛存在于人类和动物的肠道中，属于肠球菌属。作为一种条件致病菌，它在正常情况下对人体并无害，但当宿主免疫力下降或肠道菌群失衡时，屎肠球菌可能会引起感染。该菌具有典型的肠道菌特征，如耐酸、耐碱、耐胆汁等，这些特性使其能够在肠道环境中生存和繁殖。

(2)屎肠球菌的细胞形态呈球形或卵圆形，直径约为0.5-1.0微米，通常成对或短链排列。该菌的细胞壁由肽聚糖构成，并含有较多的磷壁酸，这使得它在革兰氏染色中呈现阳性反应。屎肠球菌的代谢途径相对简单，主要以糖类为能源，能够发酵多种糖类，如葡萄糖、果糖、乳糖等，但产酸能力较弱。此外，该菌还能产生一些重要的酶类，如蛋白酶、淀粉酶等，这些酶对于其代谢和致病性具有重要意义。

(3)屎肠球菌的致病性主要与其产生的毒素和侵袭性因子有关。该菌能够产生多种毒素，如肠毒素、溶血素等，这些毒素可以破坏宿主细胞的细胞膜，导致细胞死亡。此外，屎肠球菌还具有一定的侵袭性，能够通过细胞壁上的粘附素与宿主细胞表面结合，从而侵入宿主组织。在感染过程中，屎肠球菌还可能产生一些防御机制，如生物膜形成等，以抵抗宿主的免疫反应。了解屎肠球菌的生物学特性对于预防和治疗相关感染具有重要意义。

2.2.掌握屎肠球菌的分离和纯化方法

(1)屎肠球菌的分离和纯化是微生物学研究中的基础技能。分离过程通常从含有目标菌株的样品开始，如粪便、血液或其他临床样本。首先，将样品稀释至适当浓度，然后使用选择性培养基，如含有抗生素的琼脂平板，以抑制其他细菌的生长。将稀释后的样品涂布或接种于培养基上，在适宜的温度和条件下培养，以促进目标菌株的生长。

(2)纯化目标菌株的关键在于分离出单个菌落。这可以通过平板划线法或稀释涂布平板法实现。在平板划线法中，使用接种环在平板表面进行连续划线，以逐步减少菌落数量，最终获得单个菌落。而在稀释涂布平板法中，将样品稀释后均匀涂布于平板表面，培养后可以得到分散的单个菌落。纯化后的菌落通过挑取单个菌落进行进一步培养和鉴定。

(3)在分离和纯化过程中，还需要注意无菌技术以防止污染。实验室用具需严格消毒，操作时应在无菌条件下进行。分离得到的菌株需保存在适当的培养基中，如甘油保存液或冷冻保存，以便后续研究使用。纯化后的菌株需进行形态学、生理生化特性以及分子生物学等鉴定方法，以确保分离得到的是目标菌株，并为进一步的生物学研究和应用奠定基础。

3.3.学习屎肠球菌的鉴定技术

(1)屎肠球菌的鉴定是微生物学中的重要环节，准确的鉴定对于疾病的诊断、治疗和预防至关重要。传统的鉴定方法主要包括形态学观察、生理生化试验和血清学检测等。形态学观察是鉴定过程中的第一步，通过光学显微镜观察菌体的形态、大小和排列方式，可以初步判断菌株的类型。例如，屎肠球菌的菌体通常呈球形或卵圆形，直径约为0.5-1.0微米，成对或短链排列。

(2)生理生化试验是鉴定屎肠球菌的关键步骤，通过检测菌株对特定底物的代谢能力、产生特定酶的能力以及对抗生素的敏感性，可以进一步确定菌株的身份。常见的生理生化试验包括氧化酶试验、触酶试验、乳糖发酵试验、甘露醇发酵试验等。例如，屎肠球菌通常表现为氧化酶试验阴性、触酶试验阳性、乳糖发酵试验阴性、甘露醇发酵试验阳性。此外，屎肠球菌对青霉素、万古霉素等抗生素敏感，而对链霉素、四环素等抗生素则耐药。

(3)在实际应用中，血清学检测常用于鉴定屎肠球菌的血清型。血清学鉴定基于菌株表面抗原的差异，通过特异性抗体与抗原的结合来识别菌株。常用的血清学方法包括凝集试验、免疫荧光试验等。例如，某研究报道，通过对临床分离的屎肠球菌菌株进行血清学检测，发现其中40%的菌株属于血清型D，20%的菌株属于血清型E，而剩余的40%菌株则属于其他血清型。这些数据有助于临床医生根据菌株的血清型制定相应的治疗方案。此外，分子生物学技术在屎肠球菌的鉴定中也越来越受到重视。通过聚合酶链反应（PCR）和基因测序等方法，可以更准确地鉴定菌株的种属和血清型，为临床微生物学研究和疾病防控提供有力支持。

二、实验原理

1.1.屎肠球菌的形态学特征

(1)屎肠球菌作为一种革兰氏阳性球菌，其形态学特征是细菌鉴定过程中的重要依据。在光学显微镜下，屎肠球菌菌体通常呈现出规则的球形或卵圆形，直径大约在0.5至1.0微米之间。在适宜的培养条件下，这些菌体通常以成对或短链形式存在。在某些特殊情况下，如在高浓度的营养物质中，屎肠球菌也可能呈现单个存在的形态。此外，屎肠球菌的细胞壁相对较厚，这有助于它们在肠道等复杂的环境中生存和繁殖。

(2)在涂片染色过程中，屎肠球菌通常显示出