鸡柔嫩艾美耳球虫微线蛋白-2的真核表达及免疫原性研究.docxVIP

研究报告

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鸡柔嫩艾美耳球虫微线蛋白-2的真核表达及免疫原性研究

一、研究背景

1.鸡柔嫩艾美耳球虫概述

(1)鸡柔嫩艾美耳球虫，学名为Eimeriatenella，是一种常见的禽类寄生虫，广泛存在于全球范围内的鸡场中。该虫虫体呈卵圆形，具有四个孢子囊，每个孢子囊内含有四个子孢子。鸡柔嫩艾美耳球虫的生命周期包括卵、孢子化卵、裂殖体和配子体四个阶段，其中裂殖体和配子体阶段在鸡体内完成，卵和孢子化卵阶段在鸡体外完成。鸡柔嫩艾美耳球虫的感染会导致鸡只出现腹泻、食欲减退、体重下降等症状，严重时甚至会导致死亡，给养鸡业带来巨大的经济损失。

(2)鸡柔嫩艾美耳球虫的感染主要通过消化道途径传播，当鸡只摄入了含有成熟卵囊的饲料或饮水后，卵囊在鸡只消化道内孵化出子孢子，进而侵入鸡只的肠上皮细胞，进行裂殖生殖，形成大量的裂殖体。随后，裂殖体破裂释放出大量的子孢子，这些子孢子再侵入新的肠上皮细胞，如此循环，导致鸡只肠道上皮细胞的破坏和炎症反应。鸡柔嫩艾美耳球虫感染的高发季节通常在夏季，这与高温高湿的气候条件有关。

(3)鸡柔嫩艾美耳球虫的防治是一个复杂的过程，包括疫苗接种、药物预防和环境控制等多个方面。疫苗接种是预防鸡柔嫩艾美耳球虫感染的有效手段之一，通过接种活疫苗或灭活疫苗，可以激发鸡只产生针对球虫的免疫力。药物预防则是通过在饲料或饮水中添加抗球虫药物，以降低球虫卵囊的孵化率和裂殖体的繁殖能力。环境控制则包括保持鸡舍清洁、干燥，及时清理粪便，减少球虫卵囊的积累和传播。此外，加强对鸡只的饲养管理，提高鸡只的免疫力，也是预防鸡柔嫩艾美耳球虫感染的重要措施。

2.鸡柔嫩艾美耳球虫致病机制

(1)鸡柔嫩艾美耳球虫的致病机制主要包括对肠道上皮细胞的破坏和炎症反应。研究发现，球虫在感染过程中能够侵入肠上皮细胞，并在此细胞内进行裂殖生殖，导致肠上皮细胞的大量死亡。据文献报道，感染鸡柔嫩艾美耳球虫的鸡只，其肠道上皮细胞的死亡率可达50%以上。例如，在一项研究中，感染鸡柔嫩艾美耳球虫的鸡只肠道中，肠上皮细胞损伤指数（IECI）显著升高，达到0.89，而对照组仅为0.26。

(2)球虫感染还会引发鸡只肠道的炎症反应，导致腹泻、食欲减退等症状。研究表明，炎症反应主要是由细胞因子和趋化因子等炎症介质介导的。例如，在球虫感染鸡只的肠道组织中，肿瘤坏死因子α（TNF-α）和白细胞介素-6（IL-6）等炎症因子的表达水平显著升高。在一项实验中，球虫感染组鸡只的TNF-α和IL-6表达水平分别为对照组的2.5倍和1.8倍。此外，炎症反应还会导致肠道通透性增加，使得肠道内的有害物质和病原体更容易进入血液循环，引发全身性的病理变化。

(3)鸡柔嫩艾美耳球虫感染还会对鸡只的免疫系统造成影响，降低鸡只对其他病原体的抵抗力。研究发现，球虫感染会导致鸡只肠道中巨噬细胞和淋巴细胞等免疫细胞的数量减少，进而影响免疫功能的发挥。例如，在一项研究中，感染鸡柔嫩艾美耳球虫的鸡只肠道中，巨噬细胞的数量仅为对照组的60%，淋巴细胞数量仅为对照组的70%。这种免疫抑制状态使得鸡只更容易感染其他病原体，如沙门氏菌和禽流感病毒等，进一步加剧了鸡只的病情。

3.微线蛋白-2与球虫致病性的关系

(1)微线蛋白-2（Microtubule-associatedprotein2，MAP2）是一种参与细胞骨架组装和维持细胞形态的关键蛋白。近年来，研究者发现微线蛋白-2在寄生虫的致病过程中发挥重要作用。针对鸡柔嫩艾美耳球虫，研究表明MAP2可能参与调控虫体的生长发育、侵染宿主细胞以及逃避宿主免疫反应等多个阶段。例如，通过基因敲除实验发现，缺乏MAP2的球虫株在侵染鸡胚成纤维细胞时，其入侵能力和生长速度显著降低。

(2)微线蛋白-2与球虫致病性的关系在实验室条件下得到了进一步证实。研究者通过构建表达重组MAP2蛋白的球虫株，发现这些虫株在感染宿主细胞时表现出更强的侵袭力和生存能力。此外，免疫组化技术检测表明，MAP2蛋白在球虫侵入宿主细胞过程中在虫体与宿主细胞界面区域富集。这提示MAP2可能在球虫与宿主细胞相互作用中起到桥梁作用，有助于虫体完成侵染。

(3)进一步研究表明，MAP2的免疫原性可能是其与球虫致病性关系的一个重要方面。免疫接种实验表明，抗MAP2抗体会抑制球虫的繁殖和致病能力。此外，利用重组MAP2蛋白制备的疫苗在预防鸡柔嫩艾美耳球虫感染方面展现出良好的效果。这些研究结果提示，MAP2可能成为新型球虫疫苗候选抗原，为鸡柔嫩艾美耳球虫的防控提供新的思路。

二、材料与方法

1.实验材料

(1)在本实验中，我们选取了鸡柔嫩艾美耳球虫作为研究对象。该虫种具有典型的球虫生命周期，包括卵囊、孢子化卵、裂殖体和配子体四个阶段。实验所用的球虫卵囊来源于实验室培