基于LC-MS非靶向代谢组学分析受沙门氏菌污染的椒麻鸡标志代谢物.docxVIP

研究报告

PAGE

1-

基于LC-MS非靶向代谢组学分析受沙门氏菌污染的椒麻鸡标志代谢物

一、1.样本准备与处理

1.1样本采集

(1)样本采集是进行代谢组学研究的第一步，其质量直接影响到后续数据分析和结论的可靠性。对于受沙门氏菌污染的椒麻鸡样本采集，应严格遵循食品安全和实验操作规范。首先，选择无污染的鸡源，确保样本的原始性。采集过程中，需使用无菌操作技术，避免交叉污染。采集部位应包括鸡肉、内脏以及可能被沙门氏菌污染的表面，如皮肤和羽毛。

(2)样本采集时，需注意样本的代表性。采集量应根据实验需求确定，一般建议采集足够的样本量以保证实验的统计学效力。同时，采集过程中应尽量避免样本的损伤和变质，以保持其代谢组学特征的稳定性。对于不同批次或不同条件下的椒麻鸡，应分别采集样本，以便进行对比分析。此外，采集后的样本应立即进行预处理，以减少细菌生长和代谢产物的变化。

(3)样本采集的具体操作包括：首先，使用无菌工具对鸡源进行清洗和消毒，确保采集环境的清洁。然后，根据预定的采集部位，使用无菌剪刀或手术刀等工具进行采样。采样过程中，应尽量避免挤压和切割样本，以免造成组织液流失。采集后的样本应立即放入无菌容器中，并标记样本信息，包括采集时间、采集部位、鸡源编号等。最后，将采集的样本送至实验室，按照预处理方案进行下一步处理。

1.2样本预处理

(1)样本预处理是代谢组学研究的关键环节，其目的是减少样品中的杂质，提高后续分析结果的准确性。对于受沙门氏菌污染的椒麻鸡样本，预处理步骤包括但不限于组织匀浆、蛋白沉淀、溶剂提取等。首先，将采集的鸡肉组织进行匀浆处理，以破碎细胞壁，释放细胞内物质。匀浆过程中，需控制匀浆时间和温度，以避免过度处理导致代谢组学信息的丢失。

(2)在蛋白沉淀步骤中，通常使用有机溶剂（如乙腈）与水相混合，通过改变溶液的pH值和离子强度，使蛋白质等大分子物质沉淀出来。沉淀后的蛋白质可以通过离心分离，收集上清液作为后续分析的代谢物样品。此步骤有助于去除干扰物质，如脂质、核酸等，从而提高代谢物的检测灵敏度。

(3)溶剂提取是样本预处理的重要环节，通常采用超临界流体提取或液-液萃取等方法。选择合适的溶剂和提取条件对于有效提取代谢物至关重要。提取后的溶液需要进行过滤，去除不溶性杂质，然后进行浓缩，以减少样品体积，便于后续的LC-MS分析。预处理过程中，还需注意样品的稳定性，避免因处理不当导致的代谢物降解或氧化。

1.3样本存储与运输

(1)样本存储与运输是保证代谢组学研究数据准确性的关键环节。在存储过程中，需遵循低温、避光、防震等原则。对于受沙门氏菌污染的椒麻鸡样本，推荐使用-80°C的低温冰箱进行长期存储，以减缓微生物的生长和代谢物的降解。例如，根据文献报道，在-80°C条件下，细胞内代谢物的稳定性可维持至少12个月。

(2)样本运输时，应使用保温箱或冷藏箱等专用设备，确保在运输过程中保持低温环境。根据实验要求，运输时间不宜过长，一般建议在4小时内完成。以我国某地一项研究为例，研究人员在运输受沙门氏菌污染的鸡肉样本时，采用了保温箱，并在12小时内完成了从采样地到实验室的运输，保证了样本的完整性。

(3)在样本存储与运输过程中，还需注意以下几点：首先，避免样本直接接触箱壁，以防冻伤；其次，定期检查存储和运输设备的温度，确保其在规定范围内；最后，记录样本的存储和运输时间、温度等信息，以便后续数据分析和质量追溯。例如，某研究团队在存储和运输受沙门氏菌污染的鸡肉样本时，记录了样本的存储时间、温度和运输时间，发现样本在符合规定的条件下，其代谢组学特征保持稳定。

二、2.仪器与方法

2.1LC-MS系统配置

(1)在进行代谢组学分析时，LC-MS系统配置的选择至关重要，它直接影响到实验的灵敏度和数据质量。对于受沙门氏菌污染的椒麻鸡样本分析，通常会选择高效液相色谱（HPLC）与质谱（MS）相结合的系统。HPLC部分通常采用反相液相色谱，其流动相系统包括水相（通常含有0.1%的甲酸）和有机相（通常含有乙腈），流速控制在0.5-1.0mL/min之间。流动相的温度控制在室温至40°C之间，以优化分离效果。

(2)质谱部分则采用电喷雾离子化（ESI）或大气压化学电离（APCI）等技术，以实现代谢物的离子化。在MS模式下，通常采用全扫描（FullScan）和选择性离子监测（SIM）相结合的扫描模式。对于代谢组学分析，SIM模式尤为重要，因为它允许对特定分子量的代谢物进行高灵敏度检测。此外，为了提高检测灵敏度，质谱仪通常配备有高分辨率和高灵敏度检测器，如轨道阱或高分辨飞行时间（HR-TOF）质谱仪。

(3)LC-MS系统的数据采集与分析软件也是配置中不可忽视的部分。数据采集软件应能够实时记录和分析质谱