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研究报告

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基于免疫磁分离-双重荧光定量PCR的鲜猪肉中沙门氏菌和志贺氏菌的检测

一、1.检测方法概述

1.1方法背景

(1)随着全球食品产业链的日益复杂化，食品安全问题日益突出，尤其是沙门氏菌和志贺氏菌等食源性病原体的检测与控制。沙门氏菌属和志贺氏菌属是引起人类食物中毒的主要病原菌，它们广泛存在于动物和人类肠道中，通过食物传播，对公众健康构成严重威胁。据统计，全球每年约有2000万例食源性疾病病例，其中沙门氏菌和志贺氏菌感染占较大比例。因此，对食品中的沙门氏菌和志贺氏菌进行快速、准确的检测至关重要。

(2)传统的检测方法，如培养法，虽然准确可靠，但检测周期长，耗时约24-48小时，无法满足快速检测的需求。此外，培养法对实验室条件要求较高，且容易受到交叉污染的影响。近年来，随着分子生物学技术的快速发展，基于PCR技术的检测方法因其高灵敏度、快速准确等优势，逐渐成为食品安全检测领域的研究热点。然而，PCR技术存在对样品DNA质量要求高、操作复杂等问题，限制了其在实际应用中的广泛推广。

(3)为了克服传统检测方法的局限性，提高检测效率和质量，近年来，基于免疫磁分离-双重荧光定量PCR（Immuno-MagneticSeparation-DualFluorescenceQuantitativePCR，IMMS-DQPCR）的检测方法应运而生。该方法结合了免疫磁分离技术的高效分离和PCR技术的高灵敏度检测优势，实现了对沙门氏菌和志贺氏菌的快速、准确检测。IMMS-DQPCR检测方法在实验室条件要求低、操作简便、检测周期短等方面具有显著优势，为食品安全监管提供了强有力的技术支持。例如，在我国某食品安全检测实验室的应用中，IMMS-DQPCR检测方法对沙门氏菌和志贺氏菌的检测灵敏度分别达到10^2和10^3CFU/g，检测时间缩短至4小时，有效提高了食品安全检测的效率和质量。

1.2方法原理

(1)免疫磁分离-双重荧光定量PCR（IMMS-DQPCR）是一种结合了免疫学、分子生物学和生物化学技术的检测方法，主要用于食品、环境和临床样本中沙门氏菌和志贺氏菌的检测。该方法的核心原理是利用特异性抗体与目标病原体之间的免疫反应，通过磁珠捕获病原体，实现病原体的分离和富集。具体操作过程中，首先将特异性抗体偶联到磁珠上，形成磁珠-抗体复合物。接着，将含有病原体的样本与磁珠-抗体复合物混合，病原体与抗体结合后，通过磁力将结合的复合物从样本中分离出来。

(2)分离出的磁珠-病原体复合物随后进行核酸提取，提取过程中，通过细胞裂解和核酸提取试剂盒，从磁珠上释放病原体的DNA。提取得到的DNA用于后续的PCR扩增反应。在PCR反应中，利用针对沙门氏菌和志贺氏菌的特异性引物，对目标病原体的DNA进行扩增。由于引物设计时考虑了病原体的特异性，因此PCR扩增反应只针对目标病原体进行，不会对其他非目标微生物产生交叉反应。此外，为了实现双重检测，通常会在引物序列中设计不同的荧光标记，以便在PCR扩增过程中同时检测两种病原体。

(3)PCR扩增完成后，通过荧光定量PCR仪对扩增产物进行定量分析。荧光定量PCR仪利用荧光信号的变化来检测PCR产物，从而实现对病原体的定量。在荧光定量PCR过程中，随着PCR反应的进行，荧光信号的强度会随着靶标DNA浓度的增加而增加。通过标准曲线的建立，可以计算出样本中病原体的数量。IMMS-DQPCR方法具有灵敏度高、特异性强、检测速度快等优点，适用于食品、环境和临床样本中沙门氏菌和志贺氏菌的快速检测，为食品安全和公共卫生提供了有力保障。

1.3方法优势

(1)免疫磁分离-双重荧光定量PCR（IMMS-DQPCR）方法在食品安全检测领域具有显著优势。首先，该方法具有极高的灵敏度，能够检测到低至10^2CFU/g的沙门氏菌和10^3CFU/g的志贺氏菌，远高于传统培养法的检测限。例如，在2019年的一项研究中，IMMS-DQPCR对鸡肉样品中的沙门氏菌检测限达到了10^2CFU/g，而传统培养法检测限为10^4CFU/g，显著缩短了检测周期。

(2)IMMS-DQPCR方法操作简便，检测周期短，通常在4小时内即可完成检测，极大地提高了检测效率。与传统培养法相比，IMMS-DQPCR减少了样品处理和培养过程，降低了操作难度。在2020年的一项实验中，IMMS-DQPCR对鲜猪肉样品的检测时间平均为3.5小时，而传统培养法需要48小时才能得出结果，显著缩短了检测周期。

(3)IMMS-DQPCR方法具有高度特异性，能够有效避免交叉污染和假阳性结果。在PCR反应中，特异性引物和探针的设计确保了仅对目标病原体进行扩增和检测。例如，在某食品安全检测实验室的应用中，IMMS-DQP