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研究报告

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基于pegB基因的鸡白痢沙门氏菌、鸡伤寒沙门氏菌分子鉴别方法的建立

一、研究背景

1.鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌的概述

(1)鸡白痢沙门氏菌（Salmonellapullorum）和鸡伤寒沙门氏菌（Salmonellatyphimurium）是两种常见的沙门氏菌，对家禽养殖业构成严重威胁。鸡白痢沙门氏菌主要感染雏鸡，导致鸡只生长迟缓、死亡率增加，对养殖业的经济损失巨大。据统计，全球每年因鸡白痢沙门氏菌感染造成的经济损失高达数十亿美元。鸡伤寒沙门氏菌则主要感染成年鸡，虽然死亡率较低，但可导致鸡只生长速度下降，产蛋率降低，同样给养殖业带来经济损失。

(2)鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌的病原菌属于沙门氏菌属，革兰氏阴性，呈短杆状，有鞭毛，无芽孢。两种病原菌的致病机制相似，主要通过破坏宿主肠道黏膜屏障，导致肠道菌群失调，进而引发一系列临床症状。鸡白痢沙门氏菌感染的主要症状包括腹泻、脱水、食欲不振、体重下降等；而鸡伤寒沙门氏菌感染则表现为精神萎靡、食欲不振、发热、呼吸困难等。值得注意的是，两种病原菌的感染率在不同地区和不同饲养条件下存在较大差异。

(3)鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌的传播途径主要包括消化道、呼吸道和垂直传播。饲养管理不善、环境卫生差、饲料和水源污染等都是病原菌传播的重要因素。此外，携带病原菌的昆虫、鸟类等动物也可能会成为传播媒介。在实际生产中，一旦发生鸡白痢沙门氏菌或鸡伤寒沙门氏菌感染，应立即采取隔离、消毒、药物治疗等综合措施进行控制。近年来，随着分子生物学技术的不断发展，基于基因分型的方法在病原菌的鉴别和溯源方面取得了显著成果，为我国鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌的防控提供了有力支持。

2.鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌的流行病学

(1)鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌的流行病学研究表明，这两种病原菌在全球范围内广泛存在，尤其在发展中国家更为普遍。据世界动物卫生组织（OIE）统计，全球每年约有数十亿只家禽受到沙门氏菌感染，其中鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌是主要病原菌之一。例如，在非洲，鸡白痢沙门氏菌的感染率可高达30%以上，而在一些亚洲国家，鸡伤寒沙门氏菌的感染率也超过了20%。

(2)鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌的流行病学特征表现为季节性波动，尤其在气温较高、湿度较大的季节，感染率显著上升。以我国为例，每年夏秋季节是鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌的高发期，这一时期养殖场的发病率可达到20%以上。此外，养殖密度大、卫生条件差、饲料污染等因素也会加剧这两种病原菌的传播。

(3)鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌的流行病学调查发现，这些病原菌可以通过多种途径传播。首先是水平传播，即通过直接接触或间接接触污染的饲料、饮水、工具等传播。其次是垂直传播，即通过带菌种蛋或亲代鸡传播给后代。例如，某养殖场在连续两年内发现鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌感染，经过调查发现，这些病原菌主要是由带菌种蛋引入的。此外，野鸟、昆虫等动物也是病原菌的潜在传播媒介。

3.现有鉴别方法的局限性

(1)现有的鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌鉴别方法主要包括传统的细菌学培养和生化试验。然而，这些方法存在诸多局限性。首先，培养过程耗时较长，通常需要数天至一周的时间，无法满足快速诊断的需求。其次，生化试验的结果可能受到环境因素和操作人员技术水平的影响，导致结果不准确。例如，在某个实验室进行的生化试验中，由于操作人员对试剂的配制和操作不熟悉，导致部分检测结果出现误判。

(2)此外，传统的鉴别方法对于一些特殊菌株的鉴定能力有限。由于鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌的生化特征相似，有时难以区分。特别是在病原菌的耐药性增强的情况下，传统的生化试验可能无法准确判断菌株的耐药性。例如，在某个养殖场爆发沙门氏菌感染时，由于耐药菌株的存在，传统的生化试验未能有效区分耐药和非耐药菌株。

(3)另外，现有的鉴别方法在病原菌的分子水平鉴定上存在不足。虽然PCR技术等分子生物学方法可以提高鉴定的准确性和灵敏度，但部分方法仍需依赖实验室设备和技术人员，难以在基层兽医站或养殖场普及。此外，一些分子生物学方法对样本质量要求较高，容易受到样本污染等因素的影响，导致结果不稳定。例如，在某次病原菌检测中，由于样本处理不当，导致PCR检测结果出现假阴性。

二、材料与方法

1.菌株来源与培养

(1)在本研究中，鸡白痢沙门氏菌和鸡伤寒沙门氏菌菌株均来源于我国多个地区的养殖场和兽医实验室。选取的菌株涵盖了不同血清型，以确保实验结果的全面性和代表性。菌株的采集遵循严格的无菌操作程序，以确保菌株的纯度和活性。采集过程中，采用拭子法或穿刺法从感染鸡只的粪便、血液、肠道内容物等样本中分离菌株。

(2)菌株的分离与纯化主要采用琼脂