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光热型脂质膜包覆大肠杆菌药物递送系统的构建及体外评价

一、1.光热型脂质膜材料的选择与制备

1.1光热型脂质膜材料的种类及特性

(1)光热型脂质膜材料是一类特殊的脂质材料，其主要特性在于能够在特定波长的光照射下产生热量，从而实现光热转换。这类材料在生物医学领域具有广泛的应用前景，尤其是在药物递送系统中，可以作为一种新型的给药方式。光热型脂质膜材料的种类繁多，主要包括聚乙二醇（PEG）、聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）、聚乳酸（PLA）等。这些材料具有良好的生物相容性、生物降解性和可控的释放性能，是构建光热型脂质膜包覆系统的基础。

(2)在光热型脂质膜材料的种类中，聚乙二醇（PEG）因其独特的分子结构而备受关注。PEG分子链中含有大量的羟基，这使得它能够与水分子形成氢键，从而提高材料的亲水性。此外，PEG分子链的长度和分子量可以通过化学合成进行调控，进而影响材料的物理性质和生物降解性能。在光热型脂质膜中，PEG的引入可以增强脂质膜的稳定性，降低药物释放的速率，从而实现靶向递送。

(3)聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）也是一种常用的光热型脂质膜材料。PLGA是一种生物可降解材料，具有良好的生物相容性和生物降解性。在光热型脂质膜包覆系统中，PLGA的引入可以改善脂质膜的力学性能，提高其稳定性和抗渗透性。此外，PLGA的降解产物对人体无毒，有利于提高药物递送系统的安全性。在药物释放方面，PLGA可以通过改变其分子量和组成比例来调节药物的释放速率，实现精准的药物递送。

1.2光热型脂质膜材料的筛选标准

(1)光热型脂质膜材料的筛选标准首先应考虑其生物相容性，确保材料在体内不会引起免疫反应或组织排斥。筛选过程中，需对材料的毒性进行评估，包括短期和长期毒性试验，以确保材料对细胞和组织的无害性。

(2)材料的生物降解性也是筛选的重要标准。理想的光热型脂质膜材料应在体内逐渐降解，释放出药物，同时不会在体内残留有害物质。因此，需对材料的降解速率进行评估，确保其与药物释放速率相匹配，既能保证药物的有效性，又能避免长期累积带来的风险。

(3)材料的物理化学性质，如溶解性、分散性、稳定性等，也是筛选的关键因素。这些性质直接影响到脂质膜的形成、药物负载、以及最终的递送效率。例如，材料的溶解性应适中，既便于制备，又能保证药物的有效负载；分散性要好，以保证脂质膜均匀包覆药物；稳定性要高，确保在储存和使用过程中不发生降解或聚集。

1.3光热型脂质膜材料的制备方法

(1)光热型脂质膜材料的制备方法主要包括溶剂蒸发法、热融合法、高压均质法等。溶剂蒸发法是通过将脂质和溶剂混合，然后在低温下蒸发溶剂，使脂质膜形成。例如，在制备聚乙二醇（PEG）脂质膜时，将PEG与磷脂混合，在室温下蒸发丙酮，形成均匀的脂质膜。该方法简单易行，但溶剂残留可能影响材料性能。

(2)热融合法是利用脂质在加热过程中相互融合形成膜的方法。在制备过程中，将脂质和溶剂混合，然后在60-80°C下加热至溶剂蒸发，脂质自然融合形成膜。例如，使用PLGA脂质膜时，通过热融合法可以在短时间内制备出具有良好形态和稳定性的脂质膜。该方法制备的脂质膜具有较好的生物相容性和生物降解性。

(3)高压均质法是利用高压使脂质颗粒分散成纳米级的脂质膜。在制备过程中，将脂质和溶剂混合，然后在高压均质机上处理，使脂质颗粒形成纳米脂质膜。例如，在制备脂质体时，高压均质法可以使脂质颗粒达到100-200纳米，提高脂质体的稳定性。该方法制备的脂质膜具有更高的药物负载量和更好的递送效果。研究表明，通过高压均质法制备的脂质膜在药物递送系统中具有显著的优势。

二、2.大肠杆菌的标记与培养

2.1大肠杆菌的标记方法

(1)大肠杆菌的标记方法主要分为天然标记和人工标记两大类。天然标记是指利用大肠杆菌自身存在的标记基因或标记蛋白进行标记，如荧光素酶基因、绿色荧光蛋白（GFP）等。人工标记则是通过基因工程手段引入外源标记基因或标记蛋白，以实现对大肠杆菌的标记。在天然标记中，荧光素酶基因因其表达产物荧光素酶的催化活性，能够产生稳定的荧光信号，常用于活细胞成像和追踪。而GFP作为一种天然荧光蛋白，因其绿色荧光特性和易于表达，在生物科学研究中得到了广泛应用。

(2)对于人工标记方法，最常见的是通过基因工程手段引入荧光标记基因。例如，将GFP基因插入到大肠杆菌的染色体DNA或质粒DNA中，通过转化或转染技术将标记基因导入大肠杆菌细胞内。这种标记方法具有操作简便、标记效率高、荧光信号稳定等优点。在基因工程操作中，通常采用PCR技术扩增标记基因，然后通过限制性内切酶切割质粒，将标记基因插入到质粒中。之后，通过转化或转染技术将重组质粒导入大肠杆菌细胞，从而实现标记。

(3)除了基因工程标