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研究报告

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mini-MPN-STE-qPCR法快速定量检测食品中沙门氏菌

一、概述

1.mini-MPN-STE-qPCR法的背景

(1)随着全球食品贸易的日益繁荣，食品安全问题日益凸显，其中沙门氏菌作为一种常见的食源性病原体，对人类健康构成严重威胁。沙门氏菌感染的症状包括发热、腹泻、呕吐等，严重时甚至可能导致死亡。因此，开发快速、灵敏且可靠的检测方法对于保障食品安全至关重要。

(2)传统沙门氏菌检测方法，如培养法，存在检测周期长、灵敏度低等缺点，难以满足现代食品生产中对快速检测的需求。近年来，分子生物学技术在食品安全检测领域的应用日益广泛，其中qPCR技术以其高灵敏度、高特异性和快速检测等优点成为研究热点。然而，传统的qPCR技术对样品处理要求较高，操作复杂，限制了其在实际应用中的普及。

(3)为了克服传统qPCR技术的局限性，研究者们不断探索新的检测方法。mini-MPN-STE-qPCR法应运而生，该方法结合了mini-MPN技术、STE扩增技术和qPCR技术，具有更高的灵敏度和更简便的操作步骤。mini-MPN技术通过将样品中的沙门氏菌进行富集，提高了检测的灵敏度；STE扩增技术则能够特异性地扩增沙门氏菌的基因，增强了检测的准确性；而qPCR技术则作为最终检测手段，实现了快速、定量检测。mini-MPN-STE-qPCR法的出现为食品安全检测提供了新的思路和方法，有望在食品安全监管中发挥重要作用。

2.食品中沙门氏菌检测的重要性

(1)沙门氏菌作为一种重要的食源性病原体，对全球食品安全构成了巨大的威胁。根据世界卫生组织（WHO）的报告，每年有数百万人因食用受沙门氏菌污染的食品而患上疾病。在美国，每年大约有125万例沙门氏菌感染病例，其中大约4500例导致死亡。这些数据表明，沙门氏菌感染不仅对人类健康构成严重威胁，而且对社会经济产生了巨大影响。有效的食品安全检测体系对于及时发现和隔离受污染食品，降低感染风险至关重要。

(2)沙门氏菌污染的食品来源多样，包括家禽、家畜、蛋类、海鲜以及植物性食品等。例如，2018年，美国爆发了一起因鸡蛋引起的沙门氏菌疫情，导致约1万人感染，其中250人住院治疗。这起事件凸显了食品供应链中任何一个环节的疏忽都可能导致大规模的食品安全事件。有效的食品中沙门氏菌检测技术不仅有助于防止病原体的传播，还可以保护消费者的健康，减少医疗费用支出。

(3)随着全球化的推进，食品国际贸易日益频繁，食品供应链的复杂性和多样性也随之增加。这使得食品中沙门氏菌的检测更加困难。例如，2012年，欧洲爆发的李斯特菌疫情就与跨国食品供应链有关。这起疫情导致了超过50人死亡，数百人住院。有效的食品中沙门氏菌检测不仅可以确保本国市场的食品安全，还能增强国家在食品出口市场的竞争力。因此，为了保障消费者的健康，维护食品产业链的稳定，食品中沙门氏菌的检测显得尤为重要。

3.传统检测方法的局限性

(1)传统食品中沙门氏菌的检测方法，如培养法，虽然在食品安全检测中发挥了重要作用，但其局限性也不容忽视。首先，培养法检测周期长，通常需要2-5天的时间才能得出结果，这对于需要快速检测的食品行业来说，无法满足紧迫的检测需求。在爆发性食品安全事件中，这种延迟可能导致病原体扩散，增加感染风险。

(2)其次，培养法对样品处理要求严格，需要特定的培养基和复杂的培养条件，这增加了检测的复杂性和成本。此外，培养法对样本数量有一定的要求，对于低浓度或微量样品，检测难度大，容易漏检。此外，培养法在检测过程中可能受到环境因素和操作者的技能水平的影响，导致结果不稳定。

(3)此外，传统的培养法对检测设备和技术有较高要求，普通实验室难以满足其条件。随着食品安全检测要求的提高，需要更加灵敏、快速的检测方法。例如，在检测过程中，可能需要对样品进行多次稀释，以适应培养基的要求，这不仅增加了操作的复杂性，也可能影响检测的准确性。因此，开发新的检测技术，如mini-MPN-STE-qPCR法，对于提高食品中沙门氏菌检测的效率和准确性具有重要意义。

二、mini-MPN-STE-qPCR法原理

1.qPCR技术的基本原理

(1)qPCR，即定量聚合酶链反应，是一种基于DNA模板的分子生物学技术，用于检测和定量特定DNA序列。其基本原理是通过PCR（聚合酶链反应）技术扩增目标DNA序列，并结合荧光标记的探针或染料，实时监测扩增过程中的荧光信号变化，从而实现对目标DNA的定量分析。

(2)qPCR过程包括三个主要步骤：变性、退火和延伸。首先，在变性步骤中，高温（通常在95°C左右）使DNA双链解开成单链，为后续的扩增做准备。接着，在退火步骤中，温度下降至适宜范围（通常在50-65°C），使荧光探针与目标DNA序列特