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油茶AACT与FAD6基因全长cDNA克隆及原核表达解析

一、引言

1.1油茶研究背景

油茶（CamelliaoleiferaAbel），作为山茶科山茶属的灌木或中乔木，是中国特有的油料树种，与油橄榄、油棕、椰子并称为世界四大木本油料植物，与乌桕、油桐和核桃并称为中国四大木本油料植物。其原产于中国，在我国的分布范围极为广泛，涵盖了从长江流域到华南的诸多地区，包括湖南、江西、广西、湖北、福建、浙江、广东、贵州、云南、海南、河南、重庆、四川、安徽、陕西等15个省区。在海南省800米以上的原生森林中，还存在着野生的油茶品种。油茶多生长于低山丘陵地带，当然，也有部分分布在中山和高山区域。

油茶具有极高的经济价值，其种子、叶、花均可入药，具备润燥滑肠，清热解毒等功效。从油茶籽中加工提炼得到的茶油，品质上乘，不饱和脂肪酸含量在90%以上，同时还富含较高含量的维生素，营养价值极高，在市场上备受青睐。此外，油茶在化工、食品等行业也有着广泛的应用，可用于制作洗涤剂、食物添加剂、饲料等，为相关产业的发展提供了重要的原料支持。

在我国的木本油料树种中，油茶占据着举足轻重的地位，其产油量占木本食用植物油的90%左右，堪称木本油料中的“产油大户”。近年来，随着人们对健康食用油的需求不断增加，以及对油茶产业认识的深入，油茶产业得到了快速发展，种植面积持续扩大。据相关统计，目前全国油茶种植面积达到6800万亩，较2012年增长30%，全国15个省份、近800个县有油茶种植，种植面积超过10万亩的油茶大县200个左右。油茶产业的发展，不仅有助于保障国家的粮油安全，还为山区农民增收致富、推动乡村振兴发挥了重要作用。

1.2油脂合成相关基因研究现状

在油脂合成代谢途径中，AACT基因和FAD6基因扮演着关键角色。AACT基因编码乙酰辅酶A酰基转移酶（AACT），在油脂合成过程中，该酶能够催化蛋白质的酰基化和去酰基化，具体来说，它催化两个分子的乙酰-COA形成乙酰乙酰-CoA，这是油脂合成过程中的一个重要步骤，为后续的反应提供了关键的中间产物。目前，关于AACT基因在其他物种中的研究已有不少成果。例如，在一些植物中，研究发现AACT基因的表达水平与油脂含量存在密切关联，通过调控AACT基因的表达，可以在一定程度上影响植物体内油脂的合成和积累。

FAD6基因编码脂肪酸脱饱和酶6（FAD6），其主要功能是控制油酸脱氢，进而形成亚油酸和亚麻酸等多不饱和脂肪酸。在植物的生长和发育、代谢途径以及环境适应等方面，FAD6都发挥着不可或缺的作用。以拟南芥为例，对其FAD6基因的研究表明，FAD6是一种质膜蛋白，可将C18:2脂肪酸去除两个饱和碳原子，生成C18:3脂肪酸。并且，FAD6基因的表达与植物的耐盐性等环境适应性也有着紧密联系，过表达FAD6会显著提高拟南芥的耐盐性，但在某些情况下，如氮限制条件下，FAD6表达水平的升高却会降低植物的盐胁迫适应能力。在油菜中，FAD6的过量表达会导致亚油酸的大量积累，从而使得油酸含量下降。这些研究成果为深入理解FAD6基因在油脂合成以及植物生理过程中的作用机制提供了重要参考。

1.3研究目的和意义

尽管油茶在我国的种植历史悠久，分布广泛且经济价值高，但目前对于油茶油脂合成的分子机制研究还相对薄弱。克隆油茶AACT基因和FAD6基因全长cDNA，并对其进行原核表达研究，具有重要的理论和实践意义。

从理论层面来看，这有助于深入揭示油茶油脂合成的内在规律。通过对这两个关键基因的研究，可以更全面地了解油茶油脂合成代谢途径中各个环节的分子调控机制，填补油茶油脂合成分子生物学领域的部分空白，为后续开展更深入的研究奠定坚实的基础。

在实践应用方面，该研究对油茶的分子育种工作具有重要的指导价值。明确AACT基因和FAD6基因在油茶油脂合成中的作用后，就可以以此为靶点，通过基因工程等手段对油茶进行遗传改良。例如，调控这两个基因的表达，有望培育出油脂含量更高、品质更优的油茶新品种，从而提高油茶的产量和经济效益，增强油茶产业的市场竞争力，进一步推动油茶产业的可持续发展，更好地满足人们对优质食用油的需求，保障国家的粮油安全。

二、材料与方法

2.1实验材料

2.1.1植物材料

实验选用的油茶品种为湘林1号，这是一种经过长期选育和实践验证的优良无性系，具有生长迅速、产量高、适应性强等特点，在油茶种植中广泛应用。于2023年10月下旬，在湖南省林业科学院油茶种植基地采集湘林1号的成熟种子。该种植基地环境适宜，管理规范，为油茶的生长提供了良好的条件。采集后的种子用自来水冲洗干净，去除表面的杂