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miR-148a在HMGB1诱导小鼠系膜细胞增殖中的功能与机制探究

一、引言

1.1研究背景与意义

在生命科学与医学领域，探索疾病的发病机制并寻找有效的治疗靶点始终是核心任务。近年来，随着对细胞分子机制研究的不断深入，微小核糖核酸（microRNA，miRNA）和高迁移率族蛋白B1（HighMobilityGroupBox-1Protein，HMGB1）在多种疾病进程中的关键作用逐渐被揭示，成为研究热点。

miR-148a作为miRNA家族的重要成员，广泛参与细胞的增殖、分化、凋亡等生物学过程。已有研究表明，miR-148a在肿瘤、心血管疾病、自身免疫性疾病等多种病症中发挥着关键的调控作用。在肿瘤方面，如在肝细胞肝癌中，患者血清miR-148a水平明显低于良性肝病组及健康体检组，且与肿瘤大小及TNM分期有关，可作为肝癌诊断与鉴别诊断、病情评估、疗效观察及预后判断的指标；在胃癌中，miR-148a在胃癌组织中平均下调，其表达水平与胃癌分期和淋巴结转移显著负相关，功能上表现为体外细胞实验具有抑制胃癌细胞迁移侵袭能力和体内具有抑制裸鼠肺转移能力。在心血管疾病领域，miR-148a能够抑制巨噬细胞的泡沫化和焦亡，从而缓解动脉粥样硬化，具体表现为通过抑制相关基因的表达，减少巨噬细胞对氧化低密度脂蛋白（oxLDL）的摄取，调控胆固醇代谢相关基因的表达以降低细胞内胆固醇含量，抑制巨噬细胞的泡沫化；同时通过调控凋亡相关基因和炎症反应相关基因的表达，抑制巨噬细胞的焦亡和减轻炎症反应。在自身免疫性疾病中，如系统性红斑狼疮，miR-148a在SLE小鼠模型T淋巴细胞异常高表达，通过直接靶向DNMT1的编码区来调控DNMT1的表达，加速细胞内低甲基化状态，诱导自身免疫相关的甲基化敏感基因启动子区域去甲基化，上调敏感基因的表达，介导疾病发生。

HMGB1是一种高度保守的核蛋白，在细胞内，它参与DNA修复、染色体维持和细胞周期调节等重要过程。然而，当细胞受到损伤、应激或发生坏死时，HMGB1会被释放到细胞外，此时它作为一种重要的炎症介质，与Toll样受体4（TLR4）、晚期糖基化终末产物受体（RAGE）等受体结合，激活下游的NF-κB和丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）等信号通路，诱导炎症因子如肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白细胞介素-6（IL-6）等的释放，从而引发和加剧炎症反应。在脓毒症中，HMGB1作为晚期促炎介质，其释放可导致全身炎症反应综合征和多器官功能障碍；在肝脏疾病如急性肝损伤、肝缺血再灌注损伤、非酒精性脂肪性肝病和酒精相关性肝病中，HMGB1从受伤或坏死的肝细胞中释放出来，引发炎症反应，其循环水平与肝脏疾病的严重程度有关，标志着它是一个有前途的生物标志物和治疗靶点；在自身免疫和炎症疾病如风湿性关节炎、牙周炎中，HMGB1也发挥着重要作用，关节滑液中胞核外的HMGB1表达上升，牙龈组织中HMGB1呈高表达，并与炎症因子的释放相关。

肾脏疾病严重威胁人类健康，其中系膜细胞的异常增殖是多种肾脏疾病如肾小球肾炎、糖尿病肾病等发病过程中的关键病理环节。研究表明，HMGB1在肾脏疾病中表达上调，并且能够诱导系膜细胞的增殖，从而促进肾脏疾病的进展。然而，目前对于HMGB1诱导系膜细胞增殖的具体分子机制尚未完全明确。鉴于miR-148a在多种细胞生物学过程和疾病中的重要调控作用，推测miR-148a可能参与了HMGB1诱导的小鼠系膜细胞增殖过程，对其深入研究有望揭示肾脏疾病发病的新机制，为临床治疗提供新的靶点和策略。如果能够明确miR-148a在这一过程中的作用及机制，或许可以为肾脏疾病的治疗开辟新的路径，例如通过调节miR-148a的表达来干预系膜细胞的增殖，从而延缓或阻止肾脏疾病的发展，具有重要的理论意义和临床应用价值。

1.2研究目的与内容

本研究旨在深入探究miR-148a在HMGB1诱导的小鼠系膜细胞增殖中所扮演的角色及其潜在的分子机制。具体而言，将从以下几个方面展开研究：

细胞实验：通过体外培养小鼠系膜细胞，利用不同浓度的HMGB1刺激系膜细胞，构建细胞增殖模型。运用CCK-8、EdU等实验方法，检测细胞增殖情况，明确HMGB1对小鼠系膜细胞增殖的影响。在此基础上，通过转染miR-148amimics、inhibitor等，改变细胞内miR-148a的表达水平，观察系膜细胞增殖的变化，以此确定miR-148a在HMGB1诱导的系膜细胞增殖中的作用。

分子机制研究：借助生物信息学分析工具，预测miR-148a的潜在靶基因，并通过双荧光素酶报告基因实验、RNA免疫沉淀（RIP）实验等