微生物检验技术(中级384)专业知识卫生专业技术资格考试梳理重点精析.docxVIP

卫生专业技术资格考试微生物检验技术(中级384)专业知识巩固要点

概述

微生物检验技术定义:应用微生物学、免疫学、分子生物学等基础理论和技术，对病原微生物、非致病性微生物及环境微生物进行分离、鉴定、定量和检测的技术的总称。

检验目的:诊断感染性疾病、流行病学调查、食品安全监测、环境监测、输血安全保障等。

发展趋势:分子生物学技术广泛应用（PCR、测序等）、自动化检测、快速检测技术、生物信息学应用、质量控制体系完善。

微生物学实验室管理

实验室生物安全:

分类:生物安全水平1-BSL1至4-BSL4。

要求:根据BSL等级配备相应防护设施（生物安全柜、压力灭菌器等）、制定操作规程和应急预案、废弃物处理。

个人防护:严格遵守着装要求，正确使用手套、口罩、护目镜等。

实验室质量控制(QA/QC):

内务管理:环境清洁、消毒，防止环境污染和交叉污染。

标本管理:标本接收、decay、处理、保存、运输的操作规范和注意事项。

方法学验证与确认:新方法或新试剂的适用性、精密度、准确度、线性范围等验证。

室间质量评价(EQA):参加各类EQA计划，监控检验结果的准确性和一致性。

标准操作规程(SOP):建立并执行覆盖所有检测环节的SOP。

记录管理:实验记录的规范性、完整性和可追溯性。

规章制度:实验室手册、安全手册、生物安全协议、传染病报告制度、人员培训档案等。

细菌检验

标本采集与处理:

原则:指导患者合理留取标本，减少污染，提高检出率。

常用标本:血液、尿液、粪便、痰液、脓液、体液、分泌物、呕吐物、洗脱液等。

处理:及时接种、避免环境因素影响（如厌氧环境、自溶）。

细菌的实验室检查:

一般性状:培养特性（形态、颜色、溶血性、气味）、动力、溶血试验。

生理生化反应:分解葡萄糖、蛋白质、脂肪等能力，产生色素、气体等，氧化酶试验、触酶试验、动力试验等。

生化鉴定系统:商品化快速鉴定卡（如VITEK、API系统）原理、操作和结果判读。

特殊染色:革兰染色、抗酸染色（结核分枝杆菌、非结核分枝杆菌）、鞭毛染色、芽孢染色等。

常用致病菌鉴定:

葡萄球菌属:表皮葡萄球菌、gevenye葡萄球菌、腐生葡萄球菌、金黄色葡萄球菌（凝固酶阳性/阴性）、溶血性葡萄球菌/链球菌。金葡菌的药敏试验（mecA基因检测）。

链球菌属:A/B/C/D群链球菌，肺炎链球菌，粪肠球菌。链球菌溶血素O（ASO）检测。

肠杆菌科:大肠埃希菌、克雷伯菌属、沙门氏菌属、志贺氏菌属、变形杆菌属等。肠道杆菌抗原/抗体检测（如AFP、O抗原）。绿脓杆菌（Pseudomonasaeruginosa）的检出。

铜绿假单胞菌:黄绿色色素、动力(+)、氧化酶(+)、潘生豆试验(++)。

鲍曼不动杆菌:无动、无荚膜、氧化酶(+)、DNA酶(+)。

厌氧菌:普通培养法、厌氧罐培养、直接涂片染色（革兰、GMS）。常见厌氧菌分类。

结核分枝杆菌:链阳试验（LAMP）、分子生物学检测（如XpertMTB/RIF）、菌素试验（PPD/IGRA）、药敏试验（药物耐受性检测）。

细菌耐药性监测:耐药性机制、常用药敏试验方法（KB法、K-B法纸片扩散法、肉汤稀释法、微量肉汤稀释法、E-test）、耐药性评价标准。

真菌检验

标本采集与处理:注意消毒对真菌培养的干扰，及时接种，注意厌氧条件对深部真菌的影响。

真菌的实验室检查:

培养:常用培养基：沙保弱培养基（SAB）、血平板、麦康凯培养基（观察qualification）。观察菌落形态、颜色、质地、溶血性、特殊表现（如厚壁孢子、假菌丝、动小体）。

形态学检查:直接镜检（湿片、染色片，如革兰染色、Giemsa染色观察假菌丝和/或芽生孢子）、镜下结构检查。

生化鉴定:商品化API系统或基于碳源利用的鉴定系统。酵母菌和霉菌的常见鉴定。

特殊染色:真菌一般染色（如GMS染色观察假菌丝和芽生孢子）、抗荧光染色法。

常见致病真菌鉴定:

浅部真菌:真菌癣菌病（毛癣菌属、表皮癣菌属、花斑癣菌/色霉菌属）。毛癣菌抗原检测。

深部真菌:念珠菌属（白色念珠菌、热带念珠菌、光滑念珠菌等）、隐球菌属（新型隐球菌）、曲霉菌属（烟曲霉菌、黑曲霉菌等）、镰刀菌属。

分子生物学技术:DNA测序、实时荧光PCR等在病原鉴定中的应用。

真菌耐药性:主要是念珠菌的二重感染问题及耐药性检测方法简介。

病毒检验

标本采集与处理:严格执行无菌操作，根据不同病毒选择合适冷藏保存，避免反复冻融。

病毒检验方法:

病原学检测:病毒分离培养（常用细胞培养、动物实验）、直接检测病毒抗原/抗体（免疫荧光、ELISA、化学发光法）、核酸检测（PCR、GeneXpert、测序）。

血清学检测:感染后不同时期的抗体检测（Ig