2026高中生物课件必修三：选3第三章第2节：基因工程的基本操作程序（第1课时：PCR、电泳）.pptxVIP

3.3.2基因工程操作的基本程序;

4.目的基因的检测与鉴定

基因工程的

基本操作程序

3.将目的基因导入受体细胞;

一、PCR的原理

二、PCR的应用

三、电泳的原理和应用;

PCR的全称是聚合酶链式反应，是一项在生物体外复制特定DNA片段的核酸合成技术。

细胞内DNA复制的时候，解旋是靠解旋酶完成的，合成DNA子链时要用到DNA聚合酶。DNA聚合酶不能从头开始合成DNA,只能从3端延伸DNA链，因此DNA复制需要引物，其作用

是给DNA聚合酶提供3’端;

模板链

DNA聚合酶不能将单个的核苷酸链连接成链，因此子链合成需要引物(最

初的已有链)。

DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有链的3-端，即子链的延伸方向是5→3。;

PCR技术中使用的DNA聚合酶是能够耐高温的Taq酶(在70C反应2h后其残留

活性大于原来的90%,在95C下反应2h后其残留活性是原来的40%)。;

变性：当PCR反应体系的温度设定为95C时，模板DNA的氢键被破坏，模板

DNA变为单链；

复性(退火):当PCR反应体系的温度降为55C时候，碱基互补的DNA片段

之间会自发形成氢键，恢复双链结构。此时会有一些引物片段与单链模板DNA结合，为Taq酶提供3。

延伸：此后将PCR反应体系的温度升高为72C°,Taq酶沿着引物3扩增DNA。;

Taq聚合酶引物1引物2

模板DNA←目的基因

3`

5`;

92

75

55

5`

变性;

思考、引物为何会结合在图中所示位置?

92

75

55

退火;

92

75

55

延伸;

92

75

55

退火;

92

75

55

延伸;

92

75

55

变性;

92

75

55

退火;

92

75

55

延伸;

长链-中长链DNA2个

含有引物A的DNA_1个

含有引物B的DNA1个;

第2次扩增

长链-中长链DNA_2个

中长链-短链DNA2个

含有引物A的DNA_3个

含有引物B的DNA_3个;

第3次扩增

长链-中长链DNA_2个

中长链-短链DNA4个短链-短链DNA2个

含有引物A的DNA7个

含有引物B的DNA_7个;

第4次扩增

长链-中长链DNA2个

中长链-短链DNA6个短???-短链DNA8个

含有引物A的DNA15个

含有引物B的DNA15个;;

思考、如果两种引物结合在模板DNA的一条链上，扩增结果如何?;

D;

D;

引物乙

D

引物乙;

C

引物甲

引物乙

引物甲一

引物乙;

PCR反应需要在一定的缓溶冲液中D进行N，需提A供：模板

4种脱氧核苷酸(dATP、dTTP、dGTP、dCTP)、两种引物和耐高温的DNA聚合酶

同时控制温度使DNA复制在体外反复进行。PCR一般要经历三十多次循环.每次循环可分为变性_、复性和延伸。控制的温度分别是5℃、55℃和72℃0;

比较项目;

高能

腺嘌呤c4

c2

OHOH

腺苷

腺嘌呤核糖核苷酸

ADP

ATP;

引物：决定PCR特异性扩增的关键

①引物的长度通常为20-30bp。

②引物自身不能含互补序列，否则会形成二级发卡结构；两个引物在3‘端也不应出现同源性，避免形成引物二聚体。

③引物浓度不宜过高，否则会错配。;

一、PCR的原理

二、PCR的应用

三、电泳的原理和应用;

思考、若目的基因两侧无合

适的限制酶切割位点怎么办?

5

53

35

3

待添加的限制酶的识别序列;

5

3

第一轮

第二轮;

5;

思考、如何利用PCR得到融合基因?;

G

3

第一轮

G

第二轮

G

G;;

WU7

WU7wU7;

3

引物2

5′-

引物3

引物1

5′

3—5

3;

一、PCR的原理

二、PCR的应用

三、电泳的原理和应用;

电泳是指带电粒子在电场的作用下发生迁移的过程。许多重要的生物大

分子，如多肽、核酸等都具有可解离的基团，在一定的pH下，这些基团会带上正电或负电。在电场的作用下，这些带电分子会向着与其所带电荷相反的电极移动。电泳利用了待分离样品中各种分子带电性质的差异_以及分子本身的大小